猪鼻支原体3-磷酸甘油醛脱氢酶表达及黏附细胞功能研究 |
| |
作者姓名: | 潘垄基 李俊 王佳 刘蓓蓓 袁厅 谢星 王丽 韦艳娜 冯志新 邵国青 吴庆侠 熊祺琰 |
| |
作者单位: | 西藏农牧学院动物科学学院,西藏林芝860000;江苏省农业科学院兽医研究所,南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所,南京210014;西藏农牧学院动物科学学院,西藏林芝860000 |
| |
基金项目: | 江苏省自然科学基金;江苏省六大人才高峰高层次人才项目;国家自然科学基金 |
| |
摘 要: | 利用原核表达载体pET-28a(+)构建猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis, Mhr)的3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)重组表达菌,研究GAPDH黏附宿主细胞的功能。结果表明:成功构建了表达rMhr-GAPDH的重组工程菌,利用IPTG诱导蛋白表达,镍柱亲和层析纯化,成功获得高纯度的rMhr-GAPDH重组蛋白。用重组蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,对Mhr液体培养物和固体菌落进行免疫杂交,均可检测到GAPDH,提示其可表达于菌体表面。将rMhr-GAPDH蛋白与人气道上皮细胞NCI-H292共孵育,利用间接免疫荧光试验可检测到黏附在细胞上的重组蛋白,利用微孔板黏附试验进一步证明rMhr-GAPDH蛋白与细胞膜蛋白的结合具有剂量依赖性,并可为其抗体所抑制。该研究构建表达和纯化了Mhr的GAPDH重组蛋白,检测到其在菌体表面的表达,并证明其具有黏附细胞能力,这有助于进一步研究Mhr黏附感染的致病机制。
|
关 键 词: | 猪鼻支原体 3-磷酸甘油醛脱氢酶 细胞黏附 |
本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录! |
|