| PDPK13′UTR双荧光素酶报告载体的构建及与gga-miR-148a-5p的靶向验证 |
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| 引用本文： | 余河玲,朱师良,何启牮,王彦.PDPK13′UTR双荧光素酶报告载体的构建及与gga-miR-148a-5p的靶向验证[J].江苏农业学报,2020,36(1):147-151. |
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| 作者姓名： | 余河玲 朱师良 何启牮 王彦 |
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| 作者单位： | 四川农业大学畜禽遗传资源发掘与创新利用四川省重点实验室,四川 成都 611130;四川农业大学畜禽遗传资源发掘与创新利用四川省重点实验室,四川 成都 611130;四川农业大学畜禽遗传资源发掘与创新利用四川省重点实验室,四川 成都 611130;四川农业大学畜禽遗传资源发掘与创新利用四川省重点实验室,四川 成都 611130 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;国家科技攻关计划 |
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| 摘 要： | 本试验通过构建PDPK1基因3′UTR双荧光素酶报告载体,并验证gga-miR-148a-5p与PDPK1的靶向关系。利用生物信息学软件预测gga-miR-148a-5p与PDPK1结合位点;利用PCR扩增PDPK1基因3′UTR序列,将其克隆到PGL3-CMV-LUC-MCS双荧光素酶报告基因载体中;将gga-miR-148a-5p及阴性对照分别与野生型gga-PDPK1-WT-3′UTR双荧光素酶报告质粒共转染至293T细胞中,双荧光素酶报告系统检测各组荧光素酶活性。Targetscan、miRbase数据库预测结果显示,gga-miR-148a-5p与PDPK1基因3′UTR存在互补结合位点;酶切及测序结果表明,双荧光素酶报告载体构建成功;荧光素酶活性试验结果表明,gga-miR-148a-5p mimics能够与PDPK1基因3′UTR结合并抑制荧光素酶活性。gga-miR-148a-5p能够与PDPK1靶向性结合,PDPK1是gga-miR-148a-5p的靶基因。
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| 关 键 词： | PDPK1 gga-miR-148a-5p 禽白血病 双荧光素酶报告基因检测系统 |
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