| 马铃薯卷叶病毒RT-LAMP检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 高彦萍,吕和平,张武,王国祥,吴雁斌,梁宏杰. 马铃薯卷叶病毒RT-LAMP检测方法的建立[J]. 核农学报, 2020, 34(9): 1943-1950. DOI: 10.11869/j.issn.100-8551.2020.09.1943 |
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| 作者姓名： | 高彦萍 吕和平 张武 王国祥 吴雁斌 梁宏杰 |
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| 作者单位： | 1甘肃省农业科学院马铃薯研究所,甘肃 兰州 730070; 2甘肃省农业科学院中药材研究所,甘肃 兰州 730070; 3甘肃省马铃薯脱毒种薯(种苗)病毒检测及安全评价工程技术研究中心,甘肃 兰州 730070 |
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| 基金项目： | 甘肃省农业生物技术研究与应用开发项目;国家重点研发计划;甘肃省农科院院列项目 |
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| 摘 要： | 为建立一种快速准确检测马铃薯卷叶病毒(potato leafroll virus,PLRV)的方法,本研究以PLRV CP(coat protein,CP)基因ORF3保守序列为靶标,建立了PLRV反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测体系,并对建立的RT-LAMP检测体系的特异性、灵敏度、实际应用效果进行评估。结果表明,建立的PLRV RT-LAMP检测方法,在62℃恒温下扩增50 min,扩增产物中加入双链嵌合荧光染色(SYBR Green Ⅰ),阳性样品颜色变为绿色,阴性样品颜色仍为褐色,可直接目测判断待检测样品是否感染PLRV。该方法只特异性检测PLRV,不与马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯S病毒(PVS)、马铃薯A病毒(PVA)和马铃薯M病毒(PVM)等其他5种马铃薯主要病毒发生交叉反应。此外,建立的PLRV RT-LAMP检测方法的灵敏度较反转录PCR(RT-PCR)方法高100倍。田间样品检测验证,该方法与标准RT-PCR方法符合率达100%。本研究建立的以SYBR Green Ι为颜色指示的PLRV可视化检测RT-LAMP方法,特异、灵敏、便捷,成本低,可满足科研、基层单位对该病毒快速诊断和检测的需要。
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| 关 键 词： | 马铃薯卷叶病毒 反转录环介导等温扩增 反转录聚合酶链式扩增 检测 |
| 收稿时间： | 2019-06-10 |
Establishment of the Detection Method for Potato Leafroll Virus by RT-LAMP |
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| GAO Yanping,LYU Heping,ZHANG Wu,WANG Guoxiang,WU Yanbin,LIANG Hongjie. Establishment of the Detection Method for Potato Leafroll Virus by RT-LAMP[J]. Acta Agriculturae Nucleatae Sinica, 2020, 34(9): 1943-1950. DOI: 10.11869/j.issn.100-8551.2020.09.1943 |
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| Authors: | GAO Yanping LYU Heping ZHANG Wu WANG Guoxiang WU Yanbin LIANG Hongjie |
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| Affiliation: | 1Potato Institute, Gansu Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou, Gansu 730070; 2Institute of Chinese Herbal Medicines,Gansu Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou, Gansu 730070; 3Gansu Potato Seed (seedling) Virus Detection and Evaluation of Engineering Technology Research Center, Lanzhou, Gansu 730070 |
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