| 山羊痘病毒P32基因的克隆、测序及在原核细胞表达 |
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| 引用本文： | 程振涛,岳筠,徐春志,李永明,许乐仁,文明,周碧君.山羊痘病毒P32基因的克隆、测序及在原核细胞表达[J].江苏农业科学,2008(4). |
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| 作者姓名： | 程振涛 岳筠 徐春志 李永明 许乐仁 文明 周碧君 |
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| 作者单位： | 贵州大学动物疫病研究所/贵州大学动物科学学院,贵州贵阳,550025 |
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| 基金项目： | 教育部科学技术研究重点项目，贵州省优秀科技教育人才省长基金，高层次人才科研条件特助经费项目 |
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| 摘 要： | 为比较山羊痘病毒贵州分离株P32基因与国内外分离株的关系,并获得P32蛋白,应用PCR方法从贵州山羊痘病毒分离株的核酸样本中扩增出P32基因片段,将PCR产物克隆至pMDl8-T载体,对重组质粒进行了基因序列测定.将测定的P32基因核苷酸序列和推导的氨基酸序列与GenBank中相应序列作比较,同源性分别达到99.4%和98.4%,表明山羊痘病毒的P32基因具有高度保守性.将P32基因克隆至原核表达载体pET-28a,成功构建重组表达质粒pET-28a-P32/LD,转化至大肠杆菌BL2l(DE3)进行诱导表达.SDS-PAGE检测显示,重组细菌在35.5 kDa处表达一条特异性的蛋白带,而阴性对照未见这条蛋白带;Western-Blotting检测证实,这条蛋白带能与山羊痘高免血清反应而显示其免疫学活性.
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| 关 键 词： | 山羊痘病毒 P32基因 基因克隆 序列分析 原核表达 |
Cloning, sequencing and expression in prokaryotic cell of goat poxvirus P32 gene |
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