β-葡萄糖苷酶bglⅠ基因在粟酒裂殖酵母中的表达及功能分析 |
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引用本文: | 付永平,李 博,王丕武.β-葡萄糖苷酶bglⅠ基因在粟酒裂殖酵母中的表达及功能分析[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2012,40(12):171-176. |
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作者姓名: | 付永平 李 博 王丕武 |
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作者单位: | 吉林农业大学 农学院;吉林市农业科学院;吉林农业大学 农学院 |
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基金项目: | 国家自然科学基金面上项目(31171568);吉林农业大学博士科研启动基金项目(201202) |
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摘 要: | 【目的】克隆绿色木霉β-葡萄糖苷酶bglⅠ基因,并在粟酒裂殖酵母细胞中进行表达分析。【方法】利用PCR技术,从绿色木霉中克隆纤维素酶β-葡萄糖苷酶bglⅠ基因的DNA序列,再通过XhoⅠ和NotⅠ2个酶切位点与粟酒裂殖酵母表达载体pREP5N连接,构建酵母真核表达载体,利用电转化方法转化粟酒裂殖酵母SP-Q01细胞,并在SP-Q01中进行表达分析,最后采用DNS法测定表达产物的酶学活性。【结果】PCR扩增得到2 380bp的bglⅠ基因序列,包括完整的CDS序列和信号肽序列,编码序列与已报道的里氏木霉纤维素酶基因序列相似性为100%;对酵母转化子进行诱导培养后,SDS-PAGE电泳检测得到大小为76ku的目的蛋白条带,在SP-Q01细胞中重组酶活性最高达155U/mL,最佳培养时间为72h,产生酶活的最适温度为60℃。【结论】成功克隆出了绿色木霉β-葡萄糖苷酶bglⅠ基因的DNA序列,该基因能在粟酒裂殖酵母细胞中成功表达,为绿色木霉β-葡萄糖苷酶bglⅠ基因的深入研究和应用奠定了基础。
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关 键 词: | 绿色木霉 β-葡萄糖苷酶 粟酒裂殖酵母 酶学活性 |
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