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| 溶葡萄球菌素基因乳腺特异表达载体的构建与检测及转基因核供体细胞的制备 | |
| 引用本文： | 上官陶,张勃伟,孙薇薇,黄欣,张涌.溶葡萄球菌素基因乳腺特异表达载体的构建与检测及转基因核供体细胞的制备[J].畜牧兽医学报,2011,42(10). |
| 作者姓名： | 上官陶 张勃伟 孙薇薇 黄欣 张涌 |
| 作者单位： | 1. 西北农林科技大学生物工程研究所,杨凌,712100 2. 西北农林科技大学动医学院,杨凌,712100 3. 西北农林科技大学生物工程研究所,杨凌712100;西北农林科技大学动医学院,杨凌712100 |
| 基金项目： | 国家转基因生物新品种培育重大专项"抗病转基因新品种培育" |
| 摘 要： | 本研究旨在构建溶葡萄球菌素基因牛乳腺特异表达载体(pEPB),转染牛胎儿成纤维细胞,为制备溶葡萄球菌素基因的转基因克隆牛提供核供体细胞.本研究以pEGFP-C1为载体骨架,通过PCR扩增牛2.6 kb的β-酪蛋白5′调控区及0.6 kb的3′侧翼区(poly A)序列作为调控序列,制备成含有绿色荧光和新霉素筛选标记的牛乳腺特异表达载体,经PCR和酶切鉴定正确后,用转染试剂FuGene HD反复转染牛pEPB乳腺上皮细胞3～5次,用催乳素诱导后,经免疫荧光分析,检测目的蛋白的表达.然后,用电转染法转染牛胎儿成纤维细胞,经G418筛选得到阳性细胞后,把阳性细胞扩大培养并提取其基因组,因为溶葡萄球菌素基因是外源基因,经PCR及Southern blot 检测来确定目的基因是否已经整合到细胞的基因组上.结果表明,溶葡萄球菌素基因在牛乳腺细胞中得到了表达,并整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组中,得到了转溶葡萄球菌索基因的核供体细胞.结果显示,本研究所获得的转基因牛胎儿成纤维细胞可作为体细胞核移植的供体细胞进行转基因克隆牛研究. |
| 关 键 词： | 溶葡萄球菌素基因 乳腺特异表达 牛乳腺上皮细胞 牛胎儿成纤维细胞 转基因核供体细胞 |
Construction of Lysostaphin Mammary-specific Expression Vector and Transfection of Somatic Cells to Provide Transgenic Donor Cell for SCNT |
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| SHANGGUAN Tao,ZHANG Bo-wei,SUN Wei-wei,HUANG Xin,ZHANG Yong.Construction of Lysostaphin Mammary-specific Expression Vector and Transfection of Somatic Cells to Provide Transgenic Donor Cell for SCNT[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,2011,42(10). | |
| Authors: | SHANGGUAN Tao ZHANG Bo-wei SUN Wei-wei HUANG Xin ZHANG Yong |
| Abstract: | |
| Keywords: | lysostaphin gene mammary-specific expression bovine mammary epithelial cells bovine fetal fibroblasts transgenic nuclear donor cells |
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