| 摘 要： | 利用显微注射法给每枚新鲜鹌鹑种蛋胚盘下腔注射滴度为1×109 TU/mL人类免疫缺陷病毒I型(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)慢病毒载体1μL,直接封口后孵化出雏,应用倒置荧光显微镜及分子生物学方法检测。结果显示:在注射慢病毒后第4天,倒置荧光显微镜下观察到发育胚胎卵黄膜上绿色荧光蛋白较强表达;试验操作240枚鹌鹑种蛋,孵化出雏34只,孵化率为14.1%;对新出雏鹌鹑解剖后,可检测到喙部、眼部、羽毛、肝脏、肾脏、盲肠、肺脏、小肠、大肠、输卵管、心脏、胸肌及大脑等内脏器官中绿色荧光蛋白广泛性表达,但在性腺中绿色荧光蛋白表达信号较弱;对发育到性成熟期的G0代19只雄性鹌鹑精液基因组聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测,其中3只为阳性,阳性率为15.7%(3/19);在3只阳性雄性鹌鹑的236只后代中,有4只经PCR及印迹杂交(Southern-blot)检测为阳性,阳性率为1.69%(4/236)。结果表明:利用慢病毒载体胚盘下腔注射成功生产出转基因鹌鹑,为转基因禽类制备提供了一种简便易行的好方法。
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