| 猪β干扰素基因的修饰及其蛋白活性的检测 |
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| 引用本文： | 徐蕙,朱艳平,刘京军,刘德辉,郭霄峰.猪β干扰素基因的修饰及其蛋白活性的检测[J].中国兽医学报,2010,30(11). |
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| 作者姓名： | 徐蕙 朱艳平 刘京军 刘德辉 郭霄峰 |
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| 作者单位： | 华南农业大学,兽医学院,广东广州510642 |
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| 基金项目： | 2007年广东省动物防疫检疫研究专项经费资助项目 |
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| 摘 要： | 为获得高效表达的重组猪β干扰素,在保留编码蛋白序列的同时,对PoIFN-β基因进行毕赤酵母偏嗜性改造,使基因序列G+C的含量增加到最大限度,并将其终止密码子改为TAA.构建了酵母表达裁体pPICZαC-PIB.pPICZαC-PIB经Sac Ⅰ酶切线性化后电转导入毕赤酵母菌株X-33.对PCR鉴定为阳性的酵母菌株进行高抗性筛选,获得1株高效表达PoIFN-β酵母菌株,其表达量约258.3 mg/L,是未经密码子改造菌株表达产物的3.4倍.经SDS-PAGE和Western blotting检测,表达产物为相时分子质量约22 000和24 000的蛋白,两者均可与抗PoIFN-β阳性血清发生特异反应.将表达产物进行氨基酸测序,测得2段随机肽段与PoIFN-β的氨基酸序列完全一致.在VSV-Vero系统上检测重组PoIFN-β对水泡性口炎病毒在Vero细胞中增殖的抑制作用,其抗病毒活性为1.88×106IU/L,是未经密码子改造菌株表达产物抗病毒活性的5.6倍.用MTT法检测PoIFN-β对猪外周血淋巴细胞成熟的影响,结果表明.猪重组PoIFN-β能有效刺激淋巴细胞转化,具有良好的免疫学活性.
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| 关 键 词： | 猪β干扰素 基因修饰 毕赤酵母 抗病毒活性 MTT |
Gene modification of porcine interferon beta and its protein activity |
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| XU Hui,ZHU Yan-ping,LIU Jing-jun,LIU De-hui,GUO Xiao-feng.Gene modification of porcine interferon beta and its protein activity[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2010,30(11). |
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| Authors: | XU Hui ZHU Yan-ping LIU Jing-jun LIU De-hui GUO Xiao-feng |
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