| 奶牛α-干扰素克隆表达和生物学活性分析 |
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| 作者姓名： | 刘颖 刘华兰 杨利国 陈焕春 郭爱珍 |
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| 作者单位： | 1. 华中农业大学,农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉430070;华中农业大学,动物医学院,预防兽医学省重点实验室,湖北,武汉430070
2. 华中农业大学,动物科技学院,湖北,武汉430070 |
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| 基金项目： | 国家"973"计划资助项目，湖北省自然科学基金重大项目，艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治科技重大专项项目 |
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| 摘 要： | 提取经植物血凝素诱导培养的我国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛α-干扰素(BoIFN-α)成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为牛α-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌BL21中实现了高效表达,表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在。用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性。重组奶牛α-干扰素对VSV的抗病毒活性为4.26×105U/mL,对IBRV的抗病毒活性为8.91×104U/mL。结果表明,重组奶牛α-干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定。
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| 关 键 词： | 奶牛 α-干扰素 融合蛋白 抗病毒活性 |
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