用M_(13)克隆系统建立牛传染性鼻气管炎病毒基因组无性繁殖系

用M_(13)克隆系统对牛传染性鼻气管炎病毒进行克隆,获得14个重组体。用其中9.6kb片段制成的探针,可与IBRV—DNA进行杂交,证实已建立了IBRV基因组的无性繁殖系。 牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)属于疱疹病毒,它的基因组是线性双链DNA,约154kb(千碱基对)。 M_13为丝状雄性特异的大肠杆菌噬菌体,它具有一个单链环状DNA基因组及蛋白外壳,当感染宿主细胞后,单链环状的基团组(ssDNA)转变为双链环状的复制型((?)DNA)。M_(13)DNA经改造已成为有效的克隆载体,并广泛地应用于核酸的序列分析及单链DNA探针。我们采用了M_(13)mp作为克隆载体。改建的M_(13)载体转染JM_(103)细菌后可以产生有活性的β—半乳糖苷酶(Lac~ ),在用IPTG诱生和用X-gal作为酶底物时可以形成蓝色空斑,在Lac DNA的多个单一酶切点序列中插入外源基因,就不能产生有活性的半乳糖苷酶,从而形成透明空斑,可以用这种正性标记挑选重组体。