低温和低pH胁迫下青贮乳酸菌OL77的内参基因筛选及CspP基因的表达模式分析

为了明确低温青贮中筛选出的优异耐低温乳酸菌菌株戊糖片球菌OL77在低温和低pH胁迫下的基因表达情况，探讨其耐低温机理，本研究通过同源克隆获得了OL77的CspP基因，运用GeNorm,NormFinder,BestKeeper和RefFinder程序，基于SYBR-Green的实时荧光定量PCR(RT-qPCR)筛选OL77在低温和低pH胁迫条件下表达稳定的内参基因，并利用其研究了CspP基因的低温表达模式。结果表明：OL77在受到外界低温和低pH胁迫时表达较稳定的内参基因为Ldh、tufA和6PGDH，而GAPDH和GyrA是表达较不稳定的内参基因。采用同源克隆获得OL77的CspP基因片段，以Ldh和6PGDH为内参基因，对25、15和5℃下培养0、1、3、6、12、24 h的OL77中CspP基因的相对表达量进行分析，发现低温条件下CspP基因瞬时表达量激增，在5℃下上调86倍，这可能是OL77耐低温的主要原因，OL77对低温的适应性部分来自其较强的冷休克蛋白表达能力。CspP基因可用作OL77低温适应性的指示基因。