| 蒙古马胎儿成纤维细胞永生化细胞体系建立的研究 |
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| 引用本文： | 田书岳,神英超,王希生,王敏,伊敏娜,才文道力玛,陶力,赵毕力格,芒来,格日乐其木格. 蒙古马胎儿成纤维细胞永生化细胞体系建立的研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 46-57. DOI: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2023.01.005 |
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| 作者姓名： | 田书岳 神英超 王希生 王敏 伊敏娜 才文道力玛 陶力 赵毕力格 芒来 格日乐其木格 |
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| 作者单位： | 内蒙古农业大学动物科学学院, 内蒙古自治区马属动物遗传育种与繁殖重点实验室, 农业农村部马属动物遗传育种与繁殖科学观测实验站, 马属动物研究中心, 呼和浩特 010018 |
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| 基金项目： | 国家基金2019年联合基金（31961143025）；内蒙古自治区2021年度科技重大专项（2021ZD0018）；内蒙古重大基金（2019ZD03）；国家自然基金项目（31960657） |
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| 摘 要： | 【目的】试验旨在建立永生化蒙古马胎儿成纤维细胞(equine fetal fibroblasts, EFFs)系，为马繁殖与发育生物学研究提供参考。【方法】采用1 mg/mL胶原酶Ⅳ消化分离原代EFFs,利用表达人端粒酶逆转录亚基(hTERT)和潮霉素B抗性的pLV-hTERT-IRES-hygro慢病毒感染EFFs,经潮霉素B筛选得到阳性细胞hTERT-EFFs,以第3代EFFs为对照，采用实时荧光定量PCR检测hTERT mRNA的表达水平，CCK-8法绘制生长曲线检测细胞增殖能力，流式细胞仪检测细胞凋亡情况，β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况。使用DNAMAN软件比对分析人、马、小鼠、牛、绵羊、猪多物种TERT核苷酸、蛋白和端粒酶RNA组分(TERC)序列相似性。【结果】原代EFFs在实验室培养体系下可传至17代，但第17代细胞发生了衰老。hTERT基因可成功转入EFFs,并至少稳定表达20代。然而hTERT-EFFs增殖能力显著低于EFFs(P<0.05),hTERT-EFFs凋亡早期细胞率显著高于EFFs(P<0.05)。细胞衰老检测结果表明，hTERT-EFFs...
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| 关 键 词： | 蒙古马 马胎儿成纤维细胞(EFFs) 永生化 人端粒酶逆转录亚基(hTERT) 细胞增殖 |
| 收稿时间： | 2022-05-31 |
Study on Establishment of Immortalized Cell System of Equine Fetal Fibroblasts in Mongolian Horse |
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| TIAN Shuyue,SHEN Yingchao,WANG Xisheng,WANG Min,YI Minna,Tseweendolmaa,TAO Li,ZHAO Bilig,Manglai,Gerelchimeg. Study on Establishment of Immortalized Cell System of Equine Fetal Fibroblasts in Mongolian Horse[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2023, 50(1): 46-57. DOI: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2023.01.005 |
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| Authors: | TIAN Shuyue SHEN Yingchao WANG Xisheng WANG Min YI Minna Tseweendolmaa TAO Li ZHAO Bilig Manglai Gerelchimeg |
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| Affiliation: | Equine Research Center, Scientific Observing and Experimental Station of Equine Genetics, Breeding and Reproduction, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Inner Mongolia Key Laboratory of Equine Genetics, Breeding and Reproduction, College of Animal Science, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, China |
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| Abstract: | |
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