| 甘蔗ABA生物合成关键酶SoNCED基因克隆及表达分析 |
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| 引用本文： | 谭秦亮,潘成列,杨丽涛,李杨瑞,欧克纬,朱鹏锦. 甘蔗ABA生物合成关键酶SoNCED基因克隆及表达分析[J]. 南方农业学报, 2017, 48(1): 1-8. DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2017.01.1 |
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| 作者姓名： | 谭秦亮 潘成列 杨丽涛 李杨瑞 欧克纬 朱鹏锦 |
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| 作者单位： | 广西亚热带作物研究所,南宁530001广西大学农学院,南宁530004亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,南宁530004广西田园生化股份有限公司,南宁,530007中国农业科学院甘蔗研究中心/广西农业科学院甘蔗研究所/农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室/广西甘蔗遗传改良重点实验室，南宁530007广西亚热带作物研究所,南宁,530001 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划项目，国家国际合作项目，广西八桂学者和特聘专家专项经费项目，国家现代农业产业技术体系广西甘蔗创新团队项目 |
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| 摘 要： | [目的]克隆甘蔗体内9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶(9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase,NCED)基因,分析其基本生物学信息及在逆境胁迫下的表达分析,为进一步探讨SoNCED基因在甘蔗脱落酸(ABA)生物合成途径中的作用提供理论依据.[方法]以甘蔗品种桂糖21号为材料,待蔗苗长至5~6片叶时分别进行干旱、低温、高盐和氧化胁迫处理,利用反转录PCR(RT-PCR)和cDNA未端快速扩增(RACE-PCR)克隆SoNCED基因,应用生物信息学方法对获得的氨基酸序列进行分析,构建原核表达载体并进行目的蛋白的诱导表达,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析SoNCED基因在受到不同逆境胁迫时的表达情况.[结果]克隆获得的SoNCED基因(GenBank登录号JQ314108),cDNA全长为2521 bp,包含1个1827 bp的开放阅读框(ORF),编码608个氨基酸.多重序列比对及系统发育进化树分析结果表明,SoNCED基因编码的氨基酸序列与其他植物有一定的相似性,尤其与禾本科C4植物高粱和玉米的同源性最高,均达96%.成功构建SoNCED基因的原核表达载体pET-SoNCED,且通过IPTG诱导时可得到约66.0 kD的蛋白,确定该蛋白为SoNCE基因的表达蛋白.qRT-PCR结果分析表明,SoNCED基因在干旱、低温、高盐和氧化胁迫下均能诱导表达,其中氧化胁迫下其表达量在6h时达峰值,其他胁迫方式下其表达量在12h时达峰值.[结论]成功克隆获得甘蔗SoNCED基因,并从不同逆境下的表达情况推测该基因在甘蔗体内参与了干旱、低温、高盐和氧化等非生物胁迫的调控过程.
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| 关 键 词： | 甘蔗 基因克隆 SoNCED 表达分析 原核表达 |
Cloning and expression analysis of SoNCED gene in key enzyme for sugarcane ABA biosynthesis |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | sugarcane gene cloning SoNCED expression analysis prokaryotic expression |
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