| SYBR Green I实时定量PCR方法检测2型猪圆环病毒 |
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| 引用本文： | 潘群兴,何孔旺,黄克和. SYBR Green I实时定量PCR方法检测2型猪圆环病毒[J]. 扬州大学学报(农业与生命科学版), 2007, 28(3): 13-17 |
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| 作者姓名： | 潘群兴 何孔旺 黄克和 |
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| 作者单位： | 江苏省农业科学院,兽医研究所,江苏,南京,210014;南京农业大学,动物医学院,江苏,南京,210095;江苏省农业科学院,兽医研究所,江苏,南京,210014;南京农业大学,动物医学院,江苏,南京,210095 |
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| 基金项目： | 国家重大基础研究计划项目(973-2007CB116308) |
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| 摘 要： | 利用PCR技术扩增出2型猪圆环病毒(PCV)ORF2保守区基因107 bp片段,并克隆到pMD-19-T载体上,纯化的质粒作为PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释质粒为标准模板,进行荧光定量PCR,并绘制标准曲线。再以提取的PCV-2、PCV-1、猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病毒(PRV)的DNA作为模板,采用同样体系进行实时PCR检测。结果表明:建立的实时定量PCR方法,起始模板浓度与样本阈值循环数(Ct)值之间呈很好的线性关系,标准曲线斜率为-0.32,相关系数r2为0.997,Ct值为11.9~26.9。PCV-2能扩出S型荧光曲线,熔解曲线的峰狭窄单一,而PCV-1、PPV和PRV均不能扩出。对32份健康猪和32份断奶仔猪多系统消耗综合征(PMWS)可疑猪样品定量检测:健康猪阳性率为44%(14/32),病毒载量均小于104拷贝.μL-1;PMWS可疑猪阳性率96.8%(31/32),病毒载量均大于105拷贝.μL-1。实时荧光定量PCR方法可用于2型猪圆环病毒定性及定量的检测。
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| 关 键 词： | 2型猪圆环病毒 实时荧光定量PCR 标准曲线 |
| 文章编号： | 1671-4652（2007）03-0013-05 |
| 修稿时间： | 2006-12-15 |
Identification of porcine circovirus type 2 by a real-time with SYBR Green I quantitative ploymerase chain reaction assay |
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| PAN Qun-xing,HE Kong-wang,HUANG Ke-he. Identification of porcine circovirus type 2 by a real-time with SYBR Green I quantitative ploymerase chain reaction assay[J]. Journal of Yangzhou University(Agricultural and Life Science Edition), 2007, 28(3): 13-17 |
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| Authors: | PAN Qun-xing HE Kong-wang HUANG Ke-he |
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| Affiliation: | 1. Inst of Vet Med, Jiangsu Acad of Agric Sci, Nanjing 210014, China; 2. Coll of Vet Med, Nanjing Agric Univ, Nanjing 210095, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | porcine circovirus type 2 real-time PCR standard curve |
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