柑橘溃疡病致病基因PthA核定位信号肽抗血清制备及其抑菌的研究

用PCR法扩增位于柑橘溃疡病菌致病基因pthA C-末端的3个核定位信号序列，并将其克隆到原核表达载体PET32a(+)上，经双酶切及核酸序列测定重组质粒(PthA-NLS)，其序列与GenBank中pthA的相关序列有99.9%的同一性。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导了重组多肽的表达，并用Ni2+-NTA纯化柱得到了48kD的纯化重组多肽。把重组多肽注入免疫Balb/c小白鼠，制备了相应的抗血清，Western Blotting和ELISA分析结果表明，抗血清可特异地结合重组多肽，亦可识别溃疡病菌PthA天然蛋白，获得的抗血清可以用于柑橘溃疡病的检测。利用抗血清与溃疡病菌混合接种离体冰糖橙叶片，发现抗血清能推迟溃疡病菌的致病过程，且病斑比对照小，但未能达到抗病的程度。pthA基因末端核定位信号序列的克隆、原核表达及抗血清的制备为进一步研究pthA的致病机理和研发溃疡病快速分子检测技术奠定了基础。