| 链格孢属小孢子种ISSR和RAPD-PCR最佳反应体系的建立 |
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| 引用本文： | 刘振亚,熊仁次,朱天生.链格孢属小孢子种ISSR和RAPD-PCR最佳反应体系的建立[J].北方园艺,2015(14):105-110. |
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| 作者姓名： | 刘振亚 熊仁次 朱天生 |
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| 作者单位： | 塔里木大学植物科学学院,新疆阿拉尔,843300;塔里木大学植物科学学院,新疆阿拉尔843300;南疆农业有害生物综合治理重点实验室,新疆阿拉尔843300 |
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| 基金项目： | 兵团产学研重大合作科技专项资助项目(2013AA001-1)，北京市援助和田科技攻关资助项目(201106). |
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| 摘 要： | 以13个链格孢属小孢子种菌株为试材,采用正交实验设计的方法,研究Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶和引物4个因素在4个水平上对链格孢属小孢子种的ISSR和RAPD反应体系的影响。结果表明:链格孢属小孢子种ISSR和RAPD的最佳反应体系为25μL的ISSR-PCR反应体系中,10×PCR Buffer 2.50μL,Mg2+浓度为2.50mmol/L,dNTPs浓度为0.10mmol/L,引物浓度为0.30μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1.25U;在RAPD-PCR反应体系中,10×PCR Buffer 2.50μL,Mg2+浓度为2.00mmol/L,dNTPs浓度为0.15mmol/L,引物浓度为0.60μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1.25U;在此基础上,对最佳反应体系的退火温度进行了筛选确定;在确定退火温度后,采用最佳反应体系,用ISSR引物UBC808和RAPD引物OPE07进行稳定性和通用性验证,结果表明该优化反应体系具有较好的稳定性和通用性。
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| 关 键 词： | 链格孢属小孢子种 ISSR RAPD 正交设计 体系优化 |
Optimization of ISSR and RAPD-PCR Reaction Systems for Alternaria Small-spored Species |
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