小鼠卵泡膜细胞成熟过程中Dnmts表达变化的研究

 【目的】揭示小鼠卵泡膜细胞成熟过程中DNA甲基转移酶（Dnmts）表达的变化，并初步探讨其可能的机制。【方法】对新生昆明白小鼠第3、5及8天（days post parturition，dpp3、dpp5和dpp8）的卵巢进行切片，经H.E染色，分别观察原始、初级、次级卵泡膜细胞的形成情况，统计各级卵泡的比例并对卵泡外缘的膜细胞进行计数；半定量PCR检测成熟膜细胞特异性表达基因CYP17A1及Dnmts转录水平在dpp3、dpp5、dpp8卵巢中的变化；免疫组化观察Dnmt1蛋白在dpp3、dpp5、dpp8小鼠卵巢中的分布情况。【结果】小鼠dpp3卵巢中的初级卵泡外缘存在“梭形细胞”；随出生后时间的推移，原始卵泡比例持续下降（P＜0.01），次级卵泡比例持续升高（P＜0.01），dpp3、dpp5初级卵泡比例无显著差异（P＞0.05），而dpp8下降（P＜0.05）；初级卵泡周围“梭形细胞”数量的平均水平在dpp3和dpp5无显著差异（P＞0.05），在dpp8上升（P＜0.05）；次级卵泡周围“梭形细胞”数量的平均水平在dpp3和dpp5无显著差异（P＞0.05），在dpp8上升（P＜0.01）。CYP17A1转录水平在dpp3、dpp5极低且无显著差异(P＞0.05)，在dpp8升高（P＜0.01）；Dnmt1s转录水平在dpp3、dpp5、dpp8持续升高（P＜0.01）；Dnmt1o转录水平在dpp5升高（P＜0.05），在dpp8下降（P＜0.01）；Dnmt3a转录水平在dpp5升高（P＜0.01），dpp3和dpp8转录水平无显著差异（P＞0.05）。Dnmt1免疫组化显示，卵泡颗粒细胞在dpp5、dpp8卵巢中着色呈阳性，dpp3则呈阴性；同时，“梭形细胞”在dpp3、dpp5卵巢中着色呈阴性，dpp8则呈阳性。【结论】膜细胞成熟可能导致Dnmt3a转录水平下降。Dnmt1s转录及表达水平在膜细胞成熟前较低，分化成熟后上调从而在膜细胞增殖过程中维持新建立的甲基化模式。

Study on the Variation of Dnmts Expression During Follicular Theca Cells Maturation in Mouse