| 基于双抗夹心的Cry1B毒素蛋白质TRFIA检测方法的建立与评价 |
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| 引用本文： | 徐重新,陈莎莎,张霄,刘媛,张存政,黄鹰,刘贤进.基于双抗夹心的Cry1B毒素蛋白质TRFIA检测方法的建立与评价[J].江苏农业学报,2013(1):184-188. |
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| 作者姓名： | 徐重新 陈莎莎 张霄 刘媛 张存政 黄鹰 刘贤进 |
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| 作者单位： | 南京师范大学生命科学学院,江苏省微生物与功能基因组学重点实验室;江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所农业部食品质量安全监控重点开放实验室 |
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| 基金项目： | 国家973计划项目(2012CB722505) |
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| 摘 要： | 为了建立检测Cry1B毒素蛋白质的双抗夹心时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法,利用稀土元素Eu3+作为示踪剂,以可溶性表达的抗Cry1B毒素蛋白质单链抗体(scFv)作为捕获抗体,以免疫兔血清获得的抗Cry1B毒素蛋白质多克隆抗体为检测抗体,建立检测Cry1B抗原的TRFIA技术,并对其进行方法学的综合评价。通过正交试验,获得的最佳单链抗体(Capture antibody)、多克隆抗体(Detection antibody)、Eu3+标记的二抗(Tracer antibody)浓度分别是2.500μg/ml、2.000μg/ml、1.000μg/ml。标准检测曲线灵敏度为0.170 ng/ml,线性测量范围为1.000～800.000 ng/ml。抗原类似物间无交叉反应。Cry1B毒蛋白质在大米中添加回收的批内变异系数为3.8%～6.6%、平均回收率为80.5%～84.8%,批间变异系数为2.2%～8.5%、平均回收率为84.1%～88.4%。表明本试验建立的双抗夹心Cry1B-TRFIA检测范围宽,特异性强,重复性和稳定性好。
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| 关 键 词： | 苏云金芽孢杆菌 时间分辨免疫分析 单链抗体 多克隆抗体 |
Development and evaluation of a double-antibody sandwich time-resolved fluoroimmunoassay(TRFIA) for detection of Cry1B |
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| XU Chong-xin,CHEN Sha-sha,ZHANG Xiao,LIU Yuan,ZHANG Cun-zheng,HUANG Ying,LIU Xian-jin.Development and evaluation of a double-antibody sandwich time-resolved fluoroimmunoassay(TRFIA) for detection of Cry1B[J].Jiangsu Journal of Agricultural Sciences,2013(1):184-188. |
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| Authors: | XU Chong-xin CHEN Sha-sha ZHANG Xiao LIU Yuan ZHANG Cun-zheng HUANG Ying LIU Xian-jin |
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| Institution: | 1.Jiangsu Key Laboratory for Microbes and Genomics,School of Life Science,Nanjing Normal University,Nanjing 210046,China;2.Institute of Food Quality Safety and Detection,Jiangsu Academy of Agricultural Sciences/ Key Laboratory of Control Technology and Standard for Agro-product Safety and Quality,Ministry of Agriculture,Nanjing 210014,China) |
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