不同裂解方式对微生物DNA提取的影响

分子生物学试验中的细胞裂解及DNA提取是试验的第1步,但是由于细胞种类多样、细胞壁成分复杂,DNA提取的效果容易受到提取方法的影响。针对以上问题,主要研究溶菌酶、蛋白酶K、十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate,简称SDS)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyl trimethyl ammonium bromide,简称CTAB)等4种化学方法对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌以及大肠杆菌3种代表性细菌细胞的裂解效果。结果表明:溶菌酶+SDS法对3种微生物的裂解效果都不错,但可能造成蛋白质污染且DNA碎片较多;溶菌酶+热冻法对于金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的裂解效果较好且蛋白质污染较少;蛋白酶K+CTAB法仅对金黄色葡萄球菌的裂解提取效果较好;溶菌酶+蛋白酶K法的提取效果最差。在试验中可以根据需要选择不同的裂解方式,从而达到操作性、重现性及经济性的统一。