| 小麦PDS基因VIGS载体构建体系的优化及验证 |
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| 引用本文： | 南富波,李淼淼,王昊龙,刘 伟,李卫华. 小麦PDS基因VIGS载体构建体系的优化及验证[J]. 麦类作物学报, 2014, 34(3): 285-291 |
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| 作者姓名： | 南富波 李淼淼 王昊龙 刘 伟 李卫华 |
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| 作者单位： | （石河子大学农学院/新疆兵团绿洲生态农业重点实验室，新疆石河子 832003） |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（No.31160279，No.31260357）。 |
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| 摘 要： | 为在小麦上进行VIGS体系的优化,根据GenBank中公布的小麦PDS基因序列(FJ517553.1)设计特异引物,利用RT-PCR技术克隆PDS基因片段,以BSMV:γ-2a为原载体,通过酶切将原载体中的2a基因片段替换为PDS基因片段,构建小麦PDS基因的VIGS重组载体BSMV:γ-PDS。经测序确认,其与GeneBank中登录的小麦PDS基因序列同源性为97%。重组载体经本实验室简化改良的方法进行转录模板的处理。与试剂盒所提供的方法相比,本研究将RNA酶孵育处理步骤整合入质粒提取的步骤中,省略了SDS-蛋白酶K孵育处理等步骤,降低了引入新杂质的风险,同时降低了实验成本,节省了时间和精力。体外转录的电泳结果表明,体外转录反应的产物浓度大,条带单一,可用于接种实验。抽穗期小麦穗部接种实验及实时定量PCR的结果均表明,小麦内源PDS基因被有效沉默,证实了优化的重组载体BSMV:γ-PDS体系的有效性,奠定了利用VIGS载体侵染抽穗期小麦体系优化的基础。
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| 关 键 词： | 小麦；VIGS；PDS；体外转录 |
Optimization and Validation of VIGS System with Wheat PDS Gene |
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| NAN Fubo,LI Miaomiao,WANG Haolong,LIU Wei,LI Weihua. Optimization and Validation of VIGS System with Wheat PDS Gene[J]. Journal of Triticeae Crops, 2014, 34(3): 285-291 |
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| Authors: | NAN Fubo LI Miaomiao WANG Haolong LIU Wei LI Weihua |
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