| 羊驼免疫库的制备及抗孔雀石绿纳米抗体的筛选 |
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| 引用本文： | 高海岗,刘晓文,王晓泉,刘秀梵,查丽莎,游冬,李星星. 羊驼免疫库的制备及抗孔雀石绿纳米抗体的筛选[J]. 中国动物检疫, 2020, 37(12): 128-134 |
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| 作者姓名： | 高海岗 刘晓文 王晓泉 刘秀梵 查丽莎 游冬 李星星 |
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| 基金项目： | “十三五”国家重点研发计划项目（2018YFC1602800） |
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| 摘 要： | 孔雀石绿（malachite green，MG）是一种易溶于水和乙醇等的基础染料，可在多种行业应用，并曾用于水生动物多种疾病如真菌病、寄生虫病、细菌性疾病等的治疗。但因其具有致癌等毒副作用，目前已被禁用。然而市场上仍有在水产品违法使用MG的现象，因此需要加强对该药品残留的检测。本研究选择羊驼免疫库筛选抗MG纳米抗体，通过噬菌体ELISA筛选高亲和力和特异性的纳米抗体。通过辅助噬菌体M13的救援，使得纳米抗体基因（VHH）与噬菌体外壳蛋白基因融合表达，从而使得VHH蛋白展示在噬菌体表面，通过有限稀释筛选和多次洗脱的办法，获得含有目的基因的单个噬菌克隆；将重组质粒PMES4-VHH转化到表达细胞中，进行体外表达。最后采用NI-NTA柱进行His标签纯化，得到抗MG纳米抗体，并进行SDS-PAGE电泳鉴定。结果显示：噬菌体文库成功构建，库容为3.2×108 cfu/mL；通过ELISA筛选，得到16个具有抑制效果的噬菌体克隆，经对噬菌体基因测序并翻译，得到2种氨基酸序列；将重组质粒转化至表达菌株表达、纯化，最后得到大小约为15 kDa的抗MG纳米抗体，从而为MG的下一步检测奠定了基础。
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| 关 键 词： | 纳米抗体；孔雀石绿；噬菌体展示；酶联免疫吸附测定；羊驼 |
Preparation of Alpaca Immune Repertoire and Selection of Nano-antibody against Malachite Green |
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| Gao Haigang,Liu Xiaowen,Wang Xiaoquan,Liu Xiufan,Zha Lish,You Dong,Li Xingxing. Preparation of Alpaca Immune Repertoire and Selection of Nano-antibody against Malachite Green[J]. China Animal Health Inspection, 2020, 37(12): 128-134 |
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| Authors: | Gao Haigang Liu Xiaowen Wang Xiaoquan Liu Xiufan Zha Lish You Dong Li Xingxing |
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