| 马铃薯SSR标记多重PCR反应体系优化研究 |
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| 引用本文： | 王绍鹏,刘尚武,李勇,刘伟婷,吕典秋. 马铃薯SSR标记多重PCR反应体系优化研究[J]. 东北农业大学学报, 2010, 41(10) |
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| 作者姓名： | 王绍鹏 刘尚武 李勇 刘伟婷 吕典秋 |
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| 作者单位： | 黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所黑龙江省马铃薯工程技术研究中心; |
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| 基金项目： | 黑龙江省科技厅国际合作项目 |
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| 摘 要： | 以马铃薯品种克新18为试验材料,探讨了多重PCR反应体系主要成分、引物不同比例关系及退火温度对SSR标记扩增的影响。在不改变其他成分浓度的条件下,对PCR反应体系的4个组分(Taq酶、MgCl2、模板DNA、dNTPs)进行浓度或用量梯度试验;利用正交设计L(934)对反应体系的4对引物组合(STM0014、Pat、SSI、UGP)在3个水平上进行优化;最终确立了马铃薯SSR标记多重PCR反应优化体系,总体积为20μL;2.5μL 25 mmol.L-1 MgCl2,0.6μL 10 mmol.L-1 dNTPs,Taq酶0.8 U,模板DNA 80 ng;4 mmol.L-1的4对引物之间的用量比为2:1:2:3,退火温度为54.7℃。优化后的反应体系重复性好,扩增结果稳定可靠,能够明显区分不同的马铃薯品种。为进一步探讨马铃薯品种资源遗传多样性、构建DNA指纹图谱打下了坚实的基础。
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| 关 键 词： | 马铃薯 SSR标记 多重PCR反应体系 优化 |
Multiplex PCR reaction system optimization with potato SSR marker |
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| WANG Shaopeng,LIU Shangwu,LI Yong,LIU Weiting,LV Dianqiu. Multiplex PCR reaction system optimization with potato SSR marker[J]. Journal of Northeast Agricultural University, 2010, 41(10) |
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| Authors: | WANG Shaopeng LIU Shangwu LI Yong LIU Weiting LV Dianqiu |
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| Affiliation: | WANG Shaopeng,LIU Shangwu,LI Yong,LIU Weiting,LV Dianqiu(Viruses-free Seedling Research Institute,Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences,Heilongjiang Potato Engineering and Technology Research Center,Harbin 150086,China) |
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| Abstract: | Potato variety Kexin18 was used as testing materials in the research to study the impacts from main components in multiplex PCR reaction system,different primer ratios and annealing tempera-ture in SSR marker amplification.Concentration and gradient experiments for four components(Taq enzyme,MgCl2,DNA template and dNTPs) in PCR reaction system were used in the research with the concentration of the other component remain the same;the orthogonal design L9(34) was applied in the optimization of four primer co... |
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| Keywords: | potato SSR marker multiplex PCR reaction system optimization |
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