| 沉默羊传染性脓疱皮炎病毒DNA聚合酶基因的RNAi载体的构建 |
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| 引用本文： | 李姗姗,潘求真,崔玉东,连正兴.沉默羊传染性脓疱皮炎病毒DNA聚合酶基因的RNAi载体的构建[J].黑龙江畜牧兽医,2012(19):14-17,163. |
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| 作者姓名： | 李姗姗 潘求真 崔玉东 连正兴 |
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| 作者单位： | 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院;中国农业大学动物科技学院 |
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| 基金项目： | 国家重大转基因专项(2009ZX08010-020-2);黑龙江八一农垦大学校启动基金项目(校启B2008-5) |
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| 摘 要： | 为了构建用于沉默羊传染性脓疱皮炎病毒(Orf virus,ORFV)DNA聚合酶基因的2种载体,试验选择病毒复制所必需的DNA聚合酶基因作为干扰靶基因,并设计靶基因的扩增引物,经PCR扩增后测序;随后,与Check2载体分别经PmeⅠ和NotⅠ双酶切,酶切后连接产生Check2-靶基因(Check2-D)重组质粒;然后,利用公用网站按照RNAi序列设计的原则,设计RNAi靶点序列并合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经XhoⅠ和HpaⅠ酶切后的pll3.7载体连接产生pll3.7-shRNA质粒;最后,利用磷酸钙法进行pll3.7-shRNA质粒和Check2-D质粒共转染293T细胞,利用双荧光检测系统试剂盒检测其RNA干扰效果。结果表明:成功构建了pll3.7-shRNA质粒和Check2-靶基因重组质粒,干扰效果最好,可达到91.0%。
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| 关 键 词： | DNA聚合酶基因 RNA干扰 pll3.7载体 Check2载体 |
Construction of a vector for RNA interference targeting DNA polymerase gene of Orf virus |
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| LI Shan-shan,PAN Qiu-zhen,CUI Yu-dong,LIAN Zheng-xing.Construction of a vector for RNA interference targeting DNA polymerase gene of Orf virus[J].Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine,2012(19):14-17,163. |
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| Authors: | LI Shan-shan PAN Qiu-zhen CUI Yu-dong LIAN Zheng-xing |
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| Institution: | 1.College of life Sciences & Technology,Heilongjiang August First Land Reclamation University,Daqing 163319,China; 2.College of Animal Science and Technology,China Agricultural University,Beijing,100093,China) |
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