山羊 Notch1基因的表达及细胞定位

为了进一步了解Notch1蛋白，本研究用BLAST方法对不同动物Notch1基因的同源性及遗传进化情况进行了分析，通过PCR扩增获得Notch1基因，并构建了与GST标签融合表达的原核表达载体、与GFP标签融合表达的真核表达载体。将双酶切和测序鉴定的阳性克隆分别转化BL21感受态细胞和转染BHK21细胞进行原核和真核表达，并用Western blot和荧光显微镜鉴定。同时，与GFP标签对照确定其在细胞中的定位情况。结果显示，扩增的Notch1基因片段约780 bp,为Notch1基因的部分序列，Notch1在不同动物间的基因序列同源性为94%以上，遗传进化关系上分为3个分支。Western blot检测结果显示，构建的原核表达pGEX-KG-Notch1能够表达预期大小为56 kDa的融合蛋白；荧光显微镜检测显示Notch1与GFP的融合蛋白分布在整个细胞中，但主要集中于细胞核，而GFP空白对照仅分布于细胞质中，说明Notch1主要定位于细胞核中。本研究为进一步探索Notch1与KLP1的相互作用及其功能奠定了基础。