| GFP-ESAT6融合蛋白表达载体的构建及表达纯化 |
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| 引用本文： | 曹旭东,陈创夫,王远志,姜文亿,刘景.GFP-ESAT6融合蛋白表达载体的构建及表达纯化[J].中国兽医学报,2009,29(9). |
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| 作者姓名： | 曹旭东 陈创夫 王远志 姜文亿 刘景 |
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| 作者单位： | 曹旭东(石河子大学医学院,新疆,石河子,832002;石河子大学动物科技学院,新疆,石河子,832002);陈创夫,王远志,姜文亿,刘景(石河子大学动物科技学院,新疆,石河子,832002) |
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| 基金项目： | 国际科技合作基金资助项目 |
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| 摘 要： | 根据GenBank中发表的结核杆菌H37RV的ESAT6基因序列设计1对引物,以热灭活的结核杆菌H37Rv菌悬液为模板,用PCR方法扩增得到EsAT6基因DNA片段.将扩增片段克隆于pGM-T载体中,成功构建克隆载体pGM-T-ESAT6.分别将pET28a-GFP质粒和pGM-T-ESAT6质粒用限制性内切酶EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切,并将纯化的ESAT6基因亚克隆至pET28a-GFP中,构建原核表达载体pET28a-GFP-ESAT6.将pET28a-GFP-ESAT6转化E.coli BL 21(DE3),经IPTG诱导、SDS-PAGE和Western-blot分析,可见相对分子质量约37 200的外源蛋白带,表明GFP-ESAT6融合基因在大肠杆菌中得到了表达.用Ni-NT、A Agarose试剂盒进行蛋白纯化,获得纯化的GFP-ESAT6融合蛋白.
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| 关 键 词： | 结核分枝杆菌 原核表达 |
Expression and purification of GFP-ESAT6 in E. coli |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | ESAT6 GFP |
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