| 菠菜ISSR-PCR体系的建立与优化 |
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| 引用本文： | 杨金华,秦瑞云,付庆云,邓传良.菠菜ISSR-PCR体系的建立与优化[J].江苏农业科学,2013,41(2). |
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| 作者姓名： | 杨金华 秦瑞云 付庆云 邓传良 |
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| 作者单位： | 1. 河南科技学院高等职业技术学院,河南辉县,453003
2. 河南师范大学生命科学学院,河南新乡,453007 |
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| 基金项目： | 河南省教育厅自然科学基金，河南师范大学遗传学省级重点学科资助项目 |
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| 摘 要： | 以菠菜雌雄成株的幼嫩叶片为材料,用改良2×CTAB法提取基因组DNA,研究影响菠菜ISSR-PCR的因素,分别对模板浓度、Mg2+浓度、引物浓度、dNTPs浓度、TaqDNA聚合酶浓度进行优化,建立了适用于菠菜ISSR-PCR的反应体系(25μL):模板用量为60 ng、引物浓度为0.4 μmol/L、Mg2+浓度为2.0 mmol/L、dNTPs用量为0.2 mmol/L、Taq酶用量为0.5U.扩增程序为95℃预变性5 min,94℃变性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸2 min,循环35次,72℃延伸8 min.该体系以菠菜雌雄株进行扩增验证,得到的条带清晰、多态性高、重复性高,且在雌株中发现特异条带.
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| 关 键 词： | 菠菜 ISSR-PCR 体系 优化 |
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