团头鲂促性腺激素GtHⅡβ 亚基基因5′端启动子区克隆及表达载体构建 |
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作者姓名: | 曲宪成 崔严慧 周正峰 曲学伟 金一春 胡萍华 尚晓莉 程翠 张开岳 张勇 蒋骄云 |
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作者单位: | 1. 上海海洋大学,水产与生命学院,上海,201306 2. 烟台市牟平区渔业技术服务中心,山东,烟台,264100 |
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基金项目: | 上海市重点学科建设项目 |
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摘 要: | 利用改进的锚定PCR方法克隆了团头鲂(Megalobrama amblycephala)促性腺激素Ⅱβ(GtHⅡβ)亚基基因5′端侧翼序列,并在生物信息学方法分析的基础上构建了荧光素酶质粒表达载体。序列分析结果显示:克隆得到的GtHⅡβ亚基基因5′端侧翼序列长度为1354bp,其中包括TATA盒、ERE、ARE、PRE、GRE、LHX3、SF-1、Sp1、Pit-1、NF-Y和AP1等可能对GtHⅡβ亚基基因转录调控起重要作用的功能转录因子结合位点;转录起始位点位于-40~10bp。进一步利用PCR方法扩增得到了811bp(-771~+40bp)、601bp(-561~+40bp)、386bp(-346~+40bp)、239bp(-199~+40bp)和98bp(-58~+40bp)的5个缺失片段,并同全长片段一起分别连接至pGL3-Basic报告基因载体,成功构建了团头鲂GtHⅡβ亚基基因5′端侧翼序列的表达载体,为进一步研究、分析其转录调控机制提供了基础依据。
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关 键 词: | 团头鲂 促性腺激素Ⅱβ亚基 5'侧翼序列 启动子 表达载体 |
修稿时间: | 2010-07-27 |
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