重组N蛋白抗原检测PRRSV抗体ELISA的研究Ⅰ.ELISA方法的初步建立及其标化

以纯化的重组N蛋白作为包被抗原,对各种务件进行优化(如抗原的包被,作用时间及底物的选择),建立了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的间接ELISA方法。研究结果表明．重组抗原最适包被质量浓度为1mg／L,最适包被条件为4℃过夜．血清稀释度为1：40,待检血清和酶标二抗的反应时间分别为37℃ 30min和40min．底物用TMB溶液,37℃显色10min。本研究对ELISA板的蛋白稳定剂、血清稀释液的显色系统和终止液进行了研究。用全病毒进行的阻断试验结果表明．全病毒能够阻断阳性血清与包被重组N蛋白抗原的结合反应。用此方法对几种繁殖障碍性疾病的阳性血清进行检测．均为阴性．无交叉反应．表明建立的ELISA具有很好的特异性。板内和板间重复性试验结果为．同1份血清板内各孔的变异系数和板间各次的变异系数均小于7％．表明本方法的重复性好。