| 白斑综合征病毒(WSSV)基因VP28原核表达与检测 |
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| 引用本文： | 张正阳,张春莉,施定基,贾晓会,贾睿,何培民. 白斑综合征病毒(WSSV)基因VP28原核表达与检测[J]. 上海海洋大学学报, 2017, 26(2): 183-188 |
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| 作者姓名： | 张正阳 张春莉 施定基 贾晓会 贾睿 何培民 |
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| 作者单位： | 上海海洋大学,上海海洋大学 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划（863计划）；上海市科委项目 |
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| 摘 要： | VP28是对虾白斑综合症病毒(White Spot Syndrome Virus，WSSV) 的囊膜蛋白。将VP28基因序列密码子优化后合成，经限制性内切酶Nde I、Xho I酶切后，按正确的阅读框顺序插入到pET-28a( )表达载体上。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，经质粒双酶切、测序鉴定后，证实成功地构建了 VP28 基因原核表达载体pET-28a-VP28。转化菌经 IPTG 诱导，SDS-PAGE 显示含有与预期大小一致的约30kDa蛋白带，主要以包涵体形式表达。采用Ni-IDA-Sepharose CL-6B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化，获得了纯度为95%的大肠杆菌重组蛋白VP28。该纯化蛋白作为绝对定量Western的标准品，梯度稀释建立标准曲线，以定量检测转基因鱼腥藻7120中的VP28绝对表达量。实验结果表明，大肠杆菌BL21(DE3)表达的重组蛋白VP28与鱼腥藻7120中表达的VP28分子量基本相同，纯化后的大肠杆菌重组蛋白梯度稀释作为绝对定量Western标准曲线，计算出转基因鱼腥藻7120在培养第17天时，VP28的表达量最大,为5.14μg/mL，占转基因鱼腥藻7120总蛋白浓度的1.45%。这不仅对转基因鱼腥藻的高效培养具有重要意义，也为日后确定投喂对虾口服疫苗有效剂量防治白斑综合症奠定了基础。
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| 关 键 词： | 对虾白斑综合征病毒（WSSV）；VP28；大肠杆菌；鱼腥藻7120；定量免疫印迹 |
| 收稿时间： | 2016-04-14 |
| 修稿时间： | 2016-12-02 |
Prokaryotic gene expression and detection of white spot syndrome virus (WSSV)VP28 |
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| ZHANG Zhengyang,ZHANG Chunli,SHI Dingji,JIA Xiaohui,JIA Rui and HE Peimin. Prokaryotic gene expression and detection of white spot syndrome virus (WSSV)VP28[J]. Journal of Shanghai Ocean University, 2017, 26(2): 183-188 |
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| Authors: | ZHANG Zhengyang ZHANG Chunli SHI Dingji JIA Xiaohui JIA Rui HE Peimin |
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| Affiliation: | Shanghai Ocean University,Shanghai Ocean University |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | shrimp white spot syndrome virus(WSSV) VP28 Escherichia coli Anabaena sp. PCC 7120 quantitative Western blotting |
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