| 一步法快速构建长片段RNAi发夹的载体 |
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| 引用本文： | 刘廷利,郭冬姝,姚瑶,张保龙.一步法快速构建长片段RNAi发夹的载体[J].江苏农业学报,2021,37(5):1131-1136. |
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| 作者姓名： | 刘廷利 郭冬姝 姚瑶 张保龙 |
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| 作者单位： | 江苏省农业科学院卓越创新中心,江苏 南京 210014 |
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| 基金项目： | 江苏省自然科学基金;江苏省农业科技自主创新项目 |
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| 摘 要： | 利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术可以进行基因功能研究以及作物遗传改良,但常规构建RNAi载体方法费时费力.本研究报道了一种基于USER酶一步法快速构建RNAi发夹结构的载体2301/RNAi/OS及其应用方法,操作简便,省时省力.与已报道的利用酶切连接、Gateway兼容的同源重组或PCR直接连接等构建RNAi载体相比,该载体不需要酶切片段,片段扩增完成后即可与制备好的线性化载体进行反应,缩短操作流程和时间,提高成功率;该载体对插入片段的酶切位点和长度没有要求,理论上任何位置和长度的片段均可进入2301/RNAi/OS载体中,尤其是长片段RNAi的构建.本试验以本氏烟(Nicotiana benthamiana)PDS(Phytoene desaturase)基因为例,利用农杆菌介导的瞬时表达体系验证了该RNAi能够在植物体内有效地实现基因沉默.该载体以新霉素磷酸转移酶基因(NPTII)作为筛选标记基因,可以利用卡那霉素(Kanamycin)和G418(Geneticin)等抗生素筛选转基因阳性植株,适合单子叶和双子叶植物的遗传转化.
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| 关 键 词： | RNA干扰(RNAi) USER酶 一步法 载体构建 基因沉默 |
A one-step method for rapid construction of long-fragment RNA interfer-ence vector |
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| LIU Ting-li,GUO Dong-shu,YAO Yao,ZHANG Bao-long.A one-step method for rapid construction of long-fragment RNA interfer-ence vector[J].Jiangsu Journal of Agricultural Sciences,2021,37(5):1131-1136. |
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| Authors: | LIU Ting-li GUO Dong-shu YAO Yao ZHANG Bao-long |
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