小反刍兽疫病毒Ⅱ系与Ⅳ系毒株SYBR GreenⅠ荧光RT-PCR鉴别检测方法的建立 |
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引用本文: | 董帅,杨哲,孟卫芹,陈金龙,刘建钗,沈志强,王金良.小反刍兽疫病毒Ⅱ系与Ⅳ系毒株SYBR GreenⅠ荧光RT-PCR鉴别检测方法的建立[J].中国兽医学报,2023(12):2433-2438. |
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作者姓名: | 董帅 杨哲 孟卫芹 陈金龙 刘建钗 沈志强 王金良 |
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作者单位: | 1. 山东滨州畜牧兽医研究院;2. 河北工程大学生命科学与食品工程学院;3. 石河子大学动物科技学院 |
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摘 要: | 为建立小反刍兽疫病毒(PPRV)Ⅱ系与Ⅳ系毒株SYBR GreenⅠ荧光RT-PCR的鉴别检测方法,针对PPRV-H基因的高变区域设计1对特异性引物,确定反应条件,分析其敏感性和特异性,并对临床样本进行验证。60℃退火、76℃收集荧光信号获得试验效果最好,熔解曲线为单一峰,Ⅱ系毒株熔解温度78.63℃,Ⅳ系毒株熔解温度80.08℃,易于区分;最低检测限为10拷贝/μL,批内、批间变异系数均小于0.5%,羊口疮病毒(ORFV)等4种病毒无扩增曲线产生;检测140份临床样本,与国家标准检测方法结果符合率100%。本研究建立的SYBR GreenⅠ荧光RT-PCR检测方法可以快速、灵敏和特异地鉴别检测出PPRVⅡ系与Ⅳ系毒株,满足疫病快速诊断的需求。
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关 键 词: | 小反刍兽疫病毒 荧光RT-PCR SYBR Green I 熔解曲线 鉴别检测 |
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