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| 缺失TA35R基因减毒天坛株痘苗病毒的构建及筛选 | |
| 作者单位： | ;1.长春中医药大学基础医学院;2.军事医学科学院军事兽医研究所;3.长春中医药大学附属医院;4.吉林省肿瘤医院 |
| 摘 要： | 通过敲除痘苗病毒天坛株(vaccinia virus tiantan strain,VTT)复制非必需基因TA35R,结合双筛选标记及同源重组技术,构建TA35R基因缺失的VTT弱毒株rVTT-TA35R-。人工合成含有TA35R重组臂、同向loxp序列、早晚期启动子PE/L、EGFP及酶切位点的穿梭质粒pTA35R-EGFP。pTA35R-EGFP和野生型VTT共转染BHK-21细胞,通过绿色荧光蚀斑筛选,构建缺失TA35R基因且含FGFP基因的重组痘苗病毒rVTT-TA35R--EGFP+。采用Cre/Loxp系统敲除外源筛选标记EGFP,获得缺失TA35R基因的重组痘苗病毒rVTT-TA35R-,利用PCR方法和电子显微镜对其进行鉴定,通过MTT法检测细胞噬性以评价其减毒效果。结果表明,所构建的痘苗病毒弱毒株rVTT-TA35R-完全缺失了TA35R基因和外源筛选标记EGFP,且细胞毒性减弱。 |
| 关 键 词： | 天坛株痘苗病毒 TA35R基因 同源重组 病毒载体 |
Construction and selection of the attenuated vaccinia Tiantan strain with deleted TA35R gene |
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