绵羊Gfrα1基因的部分cDNA克隆与抗原表位多肽的原核表达 |
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引用本文: | 刘燕,罗奋华,包佳婧,刘林洪,单飞彪,吴应积.绵羊Gfrα1基因的部分cDNA克隆与抗原表位多肽的原核表达[J].畜牧兽医学报,2012,43(9):1377-1384. |
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作者姓名: | 刘燕 罗奋华 包佳婧 刘林洪 单飞彪 吴应积 |
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作者单位: | 内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室,呼和浩特,010021 |
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基金项目: | 教育部创新团队计划子课题,高等学校博士学科点博导类基金 |
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摘 要: | 旨在克隆绵羊Gfrα1基因序列,深入研究绵羊精原干细胞(SSCs)。本研究通过RT-PCR扩增和分子克隆的方法克隆到了绵羊Gfrα1基因的编码区大部分片段。结果,克隆得到的绵羊Gfrα1基因的大部分cDNA序列长1 312bp,包括1 311bp的开放阅读框(ORF),编码437个氨基酸,与牛、人、黑猩猩、大鼠和小鼠相应核苷酸序列的同源性分别为98.5%、91.3%、91.0%、88.9%和88.0%。根据获得的cDNA序列,预测已知片段的抗原表位区,并将抗原表位区序列插入pET-44a(+)载体,经转化得到重组菌,经IPTG诱导表达,并通过亲和柱层析,纯化制备GFRα1抗原表位多肽。Western blot检测发现,经诱导表达的GFRα1抗原表位多肽约为18.2ku,与预测的大小一致。绵羊Gfrα1基因的克隆和表达研究,为进一步制作该基因的多克隆抗体奠定基础,为绵羊SSCs的分子水平鉴定及功能分析提供了研究条件。
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关 键 词: | 绵羊 Gfrα1基因 克隆 序列分析 原核表达 |
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