| 大麦cDNA AFLP技术体系的优化及其应用 |
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| 引用本文： | 张新忠,吕亮杰,吕 超,许如根.大麦cDNA AFLP技术体系的优化及其应用[J].麦类作物学报,2012,32(4):633-639. |
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| 作者姓名： | 张新忠 吕亮杰 吕 超 许如根 |
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| 作者单位： | 扬州大学江苏省作物遗传生理重点实验室／扬州大学大麦研究所,江苏扬州,225009 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31071407， 31128014，30971779）；国家大麦青稞产业技术体系建设专项（CARS05）；江苏省高校重大自然科学基金项目（11KJA210002）。 |
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| 摘 要： | 为构建适合分析大麦杂种优势的cDNA-AFLP技术体系,以4个大麦不育系、2个大麦恢复系以及按4×2配制的8个杂交种为材料,对影响大麦cDNA-AFLP技术体系的几个关键因素进行了研究。结果表明,大麦cDNA-AFLP技术按以下程序可得到多态性好的清晰条带:使用百泰克公司的TRIpure Reagent总RNA提取试剂可提取到高质量的叶片总RNA;用TaKaRa的M-MLV RTase反转录合成双链cDNA;用MseⅠ和EcoRⅠ酶切6h,再用T4连接酶15℃连接接头18h;预扩PCR反应的dNTP终浓度为0.2mmol.L-1,扩增20循环效果最好;预扩产物稀释20倍后进行选择性扩增,最终用6%的变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离条带。利用该cDNA-AFLP体系对参试杂交种及其亲本的谱带类型进行了分析,亲本与杂种之间共扩增出7种类型的谱带,分别是共同表达型(P1P2F1)、P1表达型(P1)、P2表达型(P2)、F1表达型(F1)、P2F1表达型(P2F1)、P1F1表达型(P1F1)和P1P2表达型(P1P2)。其中差异谱带类型可分为四种表达模式:(1)单亲显性表达型,包括P2F1表达(P2F1)和P1F1表达(P1F1);(2)单亲沉默表达型,包括仅P1表达(P1)和仅P2表达(P2);(3)杂种上调表达型,即仅F1表达(F1);(4)杂种下调表达型,即仅P1P2表达(P1P2)。
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| 关 键 词： | 大麦 cDNA-AFLP 体系 差异谱带 |
Optimization and Application of cDNA AFLP System in Barley |
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| ZHANG Xin zhong,LV Liang jie,LV Chao,XU Ru gen.Optimization and Application of cDNA AFLP System in Barley[J].Journal of Triticeae Crops,2012,32(4):633-639. |
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| Authors: | ZHANG Xin zhong LV Liang jie LV Chao XU Ru gen |
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| Institution: | (Key Laboratory of Crop Genetics and Physiology of Jiangsu Province / Institute of Barley Research,Yangzhou University,Yangzhou,Jiangsu 225009,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Barley (Hordeum vulgare L ) cDNA-AFLP Difference spectrum |
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