猪圆环病毒Ⅱ型Cap、Rep基因原核表达质粒的构建与表达

为进一步建立猪圆环病毒Ⅱ型(PCVⅡ)的有效检测方法，以及制备结构蛋白Cap和非结构蛋白Rep的单克隆抗体。根据GenBank中登录的PCVⅡ序列，设计2对特异性引物，PCR扩增出Cap、Rep蛋白基因，连接到pMD18-T simple质粒上，测序正确的Cap和Rep基因双酶切后分别插入到pACYCDuet-1上，构建成原核表达质粒pACYCDuet-1-Cap、pACYCDuet-1-Rep和pACYCDuet-1-Rep-Cap，然后将上述原核表达质粒转化BL21(DE3)，并用IPTG进行诱导表达。结果表明：成功地在大肠杆菌BL21(DE3)中表达了猪圆环病毒Ⅱ型的Cap、Rep蛋白，且Rep、Cap蛋白共表达质粒pACYCDuet-1-Cap-Rep的表达效果优于其他2种质粒。