茶树亚硝酸还原酶基因CsNiR的克隆及表达分析

以‘龙井43’茶树叶片的cDNA为模板，利用RT?PCR技术克隆了茶树亚硝酸还原酶基因（CsNiR），得到完整的ORF全长为1 764 bp，编码587个氨基酸；所推导的氨基酸序列与垂枝桦（Betula pendula）、拟南芥（Arabidopsis thaliana）、菠菜（Spinacia oleracea）和水稻（Oryza sativa）的同源性均大于76%。生物信息学分析表明，CsNiR分子量为68.648 kD，等电点为6.12，为亲水性的非分泌蛋白；二级结构的预测显示，CsNiR具有完整的NiR 蛋白结构，含血红素蛋白β–化合物区域和4Fe-4S区域。实时荧光定量结果表明，该基因在成熟叶片中表达量高于一芽二叶和根。采用营养液水培3个茶树品种，在氮饥饿两周后分别供应正常氮素和低氮素（1和0.1 mmol · L^-1 NH₄NO₃），qRT-PCR测定发现，正常氮素处理的2 h和6 h，诱导根CsNiR表达量显著增加，叶片中的表达量变化延迟到24 h之后，且变化幅度存在基因型之间的差异；低氮处理对CsNiR表达量的影响相对较小。因此，研究CsNiR基因的表达特性及其在茶树氮素利用中所发挥的作用，需结合茶树基因型、组织部位、供氮水平等进行综合评价。

Molecular Cloning and Expression Analysis of Nitrite Reductase Gene CsNiR in Tea Plant