禽流感病毒血凝素基因的克隆及其DNA疫苗的免疫原性 |
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引用本文: | 陈化兰 于康震. 禽流感病毒血凝素基因的克隆及其DNA疫苗的免疫原性[J]. 中国兽医学报, 1997, 17(6): 555-558 |
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作者姓名: | 陈化兰 于康震 |
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作者单位: | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室 |
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摘 要: | 禽流感病毒(AIV)的表面结构蛋白血凝素(HA)是其主要保护性抗原。本研究参考已发表的H7亚型AIV的HA基因序列,设计合成了1对H7HA特异引物,以AIVA/Afri.Star./Eng-Q/983/79/(H7N1)(A/Afri.Star./Eng)核酸为模板,通过RT-PCR扩增出1条1.7kbcDNA片段。将这一片段定向克隆到pUC18中,对其5′端及3′端部分序列测定后,确证其为HAcDNA。将HA基因置于SV40启动子和增强子下游,构建了这一基因的真核表达质粒pSVH7。以此质粒100μg肌肉注射免疫3周龄SPF鸡6只,4周后以100倍鸡胚感染剂量(EID)的HA基因同源病毒对所有鸡进行攻毒,1周后以棉拭子进行泄殖腔病毒分离;免疫后1~6周每周对所有鸡翅静脉采血,分离血清,检测HI抗体。结果,100μg免疫组鸡病毒分离数为0/6,对照组为6/6;攻毒后1周免疫组鸡HI效价为1∶32~1∶64,对照组为1∶4~1∶16。表明所构建的HA基因表达质粒可作为基因疫苗诱导鸡产生免疫保护反应。
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关 键 词: | 禽流感病毒 血凝素基因 RT-PCR 克隆 DNA疫苗 |
Cloning of HA Gene of AIV and Immunogenicity of Its DNA Vaccine |
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