山羊痘病毒毒力因子KLP1的表达及多克隆抗体的制备

为了研究羊痘病毒KLP1的特性及制备其抗体,研究通过PCR扩增了山羊痘病毒毒力因子KLP1的两个结构域KLP1-1、KLP1-2,并构建了重组表达载体pET42b-KLP1-1和pET42b-KLP1-2,将重组载体转化到大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达,表达产物应用SDS-PAGE和Western-blot检测,表达蛋白经镍柱纯化或KCl染色切胶纯化,经弗氏佐剂乳化后免疫家兔,制备的抗体用Western-blot和ELISA检测评价。结果表明:克隆得到的KLP1-1基因的大小为762 bp,表达约为30 ku的蛋白,主要在上清液中表达,镍柱纯化蛋白浓度为3 mg/mL;KLP1-2的基因大小为927 bp,表达约为35 ku的蛋白,以包涵体形式表达在沉淀中,切胶纯化的蛋白浓度在1~2 mg/mL之间。免疫家兔后收集血清,经Western-blot检测可见明显的特异条带,ELISA检测的抗体效价分别为1∶512和1∶256。