| 秦川牛PDHB基因重组腺病毒载体的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 张愈,王晓宇,周兴,邱菊,昝林森,李安宁. 秦川牛PDHB基因重组腺病毒载体的构建与鉴定[J]. 中国牛业科学, 2022, 48(4): 1-5 |
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| 作者姓名： | 张愈 王晓宇 周兴 邱菊 昝林森 李安宁 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学动物科技学院,西北农林科技大学动物科技学院,四川省龙日种畜场,西北农林科技大学动物科技学院,西北农林科技大学动物科技学院,西北农林科技大学动物科技学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学(31402042)、陕西省科技统筹创新工程计划(2016KTCL02-15)。 |
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| 摘 要： | [目的]旨在通过构建秦川牛丙酮酸脱氢酶β亚基(Pyruvate dehydrogenase β subunit,PDHB)基因的重组腺病毒载体,为研究PDHB基因在牛前体脂肪细胞分化过程中的功能做准备。[方法]根据牛PDHB基因mRNA序列(GenBank Accession No.NM_001035435)设计引物,克隆该基因的编码区(Coding Sequence, CDS)序列。测序验证后将其重组到穿梭载体pAdTrack-CMV上,经PmeⅠ线性化后,转化到含有pAdEasy-1腺病毒骨架载体的E. coli BJ5183感受态细胞中进行同源重组,以获得重组质粒pAd-PDHB。再将经PacⅠ酶切线性化的pAd-PDHB转染到HEK 293A细胞中,进行病毒包装并扩增高滴度病毒Ad-PDHB,绿色荧光蛋白(GFP)标记法测定病毒滴度。将高浓度的Ad-PDHB病毒感染牛肌内前体脂肪细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测PDHB的表达量。[结果]经测序验证,本实验克隆获得的牛PDHB基因CDS与数据库GenBank收录的序列一致。将PDHB基因CDS与穿梭载体pAdTrack-CMV重组并转染HEK 293A细胞后成功获得了重组腺病毒Ad-PDHB,其滴度为1.66×109 PFU.mL-1。腺病毒Ad-PDHB侵染牛肌内前体脂肪细胞后,PDHB在mRNA的表达水平比对照组高25.5倍。[结论]成功克隆了秦川牛PDHB基因并构建了重组腺病毒质粒pAd-PDHB,并获得能够在牛肌内前体脂肪细胞中过表达PDHB基因的高滴度重组腺病毒Ad-PDHB。
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| 关 键 词： | 秦川牛 PDHB基因 腺病毒 肌内前体脂肪细胞 |
| 收稿时间： | 2022-05-08 |
| 修稿时间： | 2022-05-26 |
Construction of the recombinant adenovirus of Qinchuan cattle PDHB gene |
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| zhangyu,wangxiaoyu,zhouxing,qiuju,zanlinsen and lianning. Construction of the recombinant adenovirus of Qinchuan cattle PDHB gene[J]. China Cattle Science, 2022, 48(4): 1-5 |
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| Authors: | zhangyu wangxiaoyu zhouxing qiuju zanlinsen lianning |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Qinchuan cattle PDHB gene Adenovirus Intramuscular preadipocytes |
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