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慢病毒介导稳定表达禽β-防御素9的DF-1细胞系的建立及初步应用
作者姓名:熊修琦  耿姝  李芳果  殷冬冬  薛媚  邵颖  涂健  宋祥军  祁克宗
作者单位:兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室,安徽 合肥 230036;兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室,安徽 合肥 230036;兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室,安徽 合肥 230036;兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室,安徽 合肥 230036;兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室,安徽 合肥 230036;兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室,安徽 合肥 230036;兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室,安徽 合肥 230036;兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室,安徽 合肥 230036;兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室,安徽 合肥 230036
基金项目:国家自然科学基金;协同创新项目
摘    要:【目的】为建立能够稳定表达禽β-防御素9(AvBD9)的DF-1细胞系,并检测其表达产物对耐药大肠杆菌的抗菌活性。【方法】将AvBD9基因克隆至慢病毒载体pLOV-eGFP中,将重组质粒与psPAX2和pMD2.G共转染293T细胞,包装成含AvBD9基因的重组慢病毒,并将其感染DF-1细胞,通过嘌呤霉素筛选和纯化,获得稳定表达AvBD9蛋白的DF-1细胞系。利用RT-PCR和Western blot验证AvBD9基因在DF-1中的转录和表达;将细胞培养上清液与耐药大肠杆菌混合培养,检测其抗菌效果,并用扫描电镜观察其对菌体的损伤情况。【结果】筛选出了稳定表达AvBD9的DF-1细胞系,且AvBD9在转录水平和蛋白水平均有表达;细胞培养上清使耐药大肠杆菌的存活率低于55%,电镜观察显示菌体皱缩,损伤严重。【结论】成功建立能够稳定表达AvBD9的DF-1细胞系,为抗生素替代品的生产制备提供了借鉴思路,为进一步开展AvBD9的抗菌研究提供依据。

关 键 词:禽β-防御素9  DF-1细胞  稳定表达  抗菌活性
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