| 人蛋白激酶CK2 3个亚基cDNA的克隆与测序 |
| |
| 引用本文： | 刘新光,梁念慈,陈小文,马涧泉.人蛋白激酶CK2 3个亚基cDNA的克隆与测序[J].湛江医学院学报,2002,20(3):172-174. |
| |
| 作者姓名： | 刘新光 梁念慈 陈小文 马涧泉 |
| |
| 作者单位： | 刘新光（广东医学院生物化学和分子生物学研究所,广东湛江,524023）;梁念慈（广东医学院生物化学和分子生物学研究所,广东湛江,524023）;陈小文（广东医学院生物化学和分子生物学研究所,广东湛江,524023）;马涧泉（中山医科大学生化教研室,广东广州,510089） |
| |
| 基金项目： | 广东省自然科学基金(011766)、广东省卫生厅科研基金(B1997115与A2000487)和广东医学院博士启动基金资助项目 |
| |
| 摘 要： | 目的构建人蛋白激酶CK2 α、α′和β亚基cDNA重组表达质粒深入进行CK2结构与功能的研究.方法利用RT-PCR、定向克隆和DNA测序等进行本实验.结果通过反转录PCR从HL-60细胞中获得了人蛋白激酶CK2 α、α′和β亚基编码区cDNA,将Nde I /HindⅢ双酶切的3种PCR产物分别与同样双酶切的表达载体pT7-7进行定向连接.CaCl2法分别转化DH5 α获转化子,快速提取质粒DNA进行电泳初筛得到阳性克隆.限制性酶切分析结果表明插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符.每种CK2亚基都各随机挑选4个阳性克隆,PEG法进行纯化.采用PE ABI的Big Dye荧光标记的终止底物循环测序试剂盒,使用各种引物进行正反向DNA测序.通过测序分别在每种CK2 α、α′和β亚基的4个阳性克隆中筛选到2个、1个和2个含完全正确的人CK2 α、α′和β亚基cDAN的重组质粒克隆,其余的克隆均存在1～2个碱基突变.我们将这种含正确序列的重组质粒分别命名为pTCKA、pTCKA′和pTCKB.结论CK2全套3个亚基重组质粒克隆的成功,将为在原核细胞中表达人CK2 α、α′和β亚基以及利用人CK2 α、α′和β cDNA作为探针进行深入研究打下基础.
|
| 关 键 词： | α、α′、β亚基/蛋白激酶CK2/人 表达载体pT7-7 分子克隆 DNA序列分析 |
| 文章编号： | 1005-4057(2002)-03-0172-03 |
| 修稿时间： | 2002年2月5日 |
Cloning and sequencing of recombinant cDNAs encoding 3 subunits of human protein kinase CK2 |
| |
| LIU Xin guang,LLANG Nian ci,CHEN Xiao wen,et al.Cloning and sequencing of recombinant cDNAs encoding 3 subunits of human protein kinase CK2[J].Journal of Guangdong Medical College,2002,20(3):172-174. |
| |
| Authors: | LIU Xin guang LLANG Nian ci CHEN Xiao wen |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
|
