| 草鱼TAB1蛋白的原核重组表达及其抗体制备 |
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| 引用本文： | 韩雨希,房慧,郭佳静,李槿年. 草鱼TAB1蛋白的原核重组表达及其抗体制备[J]. 安徽农业大学学报, 2020, 47(2): 173 |
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| 作者姓名： | 韩雨希 房慧 郭佳静 李槿年 |
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| 作者单位： | 安徽农业大学动物科技学院，合肥 230036 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31672698）资助。 |
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| 摘 要： | 为了制备草鱼重组TAB1蛋白(rCiTAB1)及其特异性抗体,首先以草鱼头肾组织c DNA为模板,PCR扩增Ci TAB1基因全长序列,并依次构建重组克隆质粒p MD19-T-Ci TAB1与重组表达质粒pET-32a-Ci TAB1。该重组表达质粒经0.5 mmol·L~(-1) IPTG,37℃诱导表达12 h后获得以包涵体形式表达的重组CiTAB1蛋白(rCiTAB1)。然后,采用3种不同方法对包涵体蛋白进行变性,发现与高浓度尿素直接变性法和洗涤后尿素变性法相比,洗涤后梯度尿素变性法处理后的蛋白纯度最好,经透析复性后得到浓度为2 mg·mL~(-1)的r Ci TAB1。最后,将rCiTAB1蛋白与白油佐剂及免疫增强剂混合,室温下混合1.5h乳化成免疫原,3次免疫新西兰大白兔制备兔抗CiTAB1抗体,经间接ELISA方法和免疫琼脂双向扩散试验测得免疫后第33天血清中特异性抗体的效价分别为1∶1 048 576和1∶16。Western blot检测到一条分子量约为72 kDa的特异性条带,表明该抗体能特异性识别r Ci TAB1蛋白。研究结果为后续深入研究CiTAB1蛋白功能提供了物质基础。
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| 关 键 词： | 草鱼TAB1蛋白；克隆表达；梯度洗涤尿素变性法；抗体制备 |
| 收稿时间： | 2019-09-02 |
Prokaryotic recombinant expression of TAB1 protein of Ctenopharyngodon idellus and its antibody preparation |
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| HAN Yuxi,FANG Hui,GUO Jiajing,LI Jinnian. Prokaryotic recombinant expression of TAB1 protein of Ctenopharyngodon idellus and its antibody preparation[J]. Journal of Anhui Agricultural University, 2020, 47(2): 173 |
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| Authors: | HAN Yuxi FANG Hui GUO Jiajing LI Jinnian |
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| Affiliation: | School of Animal Science and Technology, Anhui Agricultural University, Hefei 230036 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Ctenopharyngodon idellus TAB1 protein cloning and expression gradient washing and urea denaturation antibody preparation |
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