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柑橘黄化脉明病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用
引用本文:周彦,陈洪明,王雪峰,李中安,王亮,周常勇. 柑橘黄化脉明病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 植物保护学报, 2016, 43(2): 255-259. DOI: 10.13802/j.cnki.zwbhxb.2016.02.011
作者姓名:周彦  陈洪明  王雪峰  李中安  王亮  周常勇
作者单位:1. 西南大学柑橘研究所,重庆,400712;2. 四川省安岳县柠檬科学技术研究所,安岳,642300
基金项目:国家公益性行业(农业)科研专项(201203076-01),中央高校基本科研业务费(XDJK2015A009)
摘    要:为探索柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)引起的柑橘新病害—柑橘黄脉病的早期快速检测技术,针对CYVCV核酸结合蛋白基因的保守序列设计2对特异性引物,通过优化退火温度,建立了CYVCV巢式RT-PCR检测方法,并对采自不同柑橘品种的54个CYVCV疑似样品进行了检测。结果表明,CYVCV巢式RT-PCR检测中,以55℃和60℃分别作为第1轮和第2轮扩增的退火温度时检测效果最佳;该方法检测样品中病毒总核酸的最低浓度为2.40μg/L,灵敏度较RT-PCR提高100倍。在CYVCV疑似样品检测中,巢式RT-PCR和RT-PCR的阳性检出率分别为59.26%和57.41%,前者更适用于检测不同来源的CYVCV。当尤力克柠檬、锦橙北碚-447、天草和台湾椪柑嫁接接种CYVCV后,巢式RT-PCR比RT-PCR提前10~30 d检测出病毒。表明所建立的CYVCV巢式RT-PCR检测方法适用于田间病树的早期诊断。

关 键 词:柑橘黄化脉明病毒  巢式RT-PCR  检测
收稿时间:2014-10-08

Development and application of nested RT-PCR assay for detection of Citrus yellow vein clearing virus
Zhou Yan,Chen Hongming,Wang Xuefeng,Li Zhongan,Wang Liang and Zhou Changyong. Development and application of nested RT-PCR assay for detection of Citrus yellow vein clearing virus[J]. Acta Phytophylacica Sinica, 2016, 43(2): 255-259. DOI: 10.13802/j.cnki.zwbhxb.2016.02.011
Authors:Zhou Yan  Chen Hongming  Wang Xuefeng  Li Zhongan  Wang Liang  Zhou Changyong
Affiliation:Citrus Research Institute, Southwest University, Chongqing 400712, China,Citrus Research Institute, Southwest University, Chongqing 400712, China,Citrus Research Institute, Southwest University, Chongqing 400712, China,Citrus Research Institute, Southwest University, Chongqing 400712, China,Lemon Science and Technology Institute of Anyue County, Anyue 642300, Sichuan Province, China and Citrus Research Institute, Southwest University, Chongqing 400712, China
Abstract:
Keywords:Citrus yellow vein clearing virus (CYVCV)  nested RT-PCR  detection
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