| 罗非鱼源无乳链球菌的间接ELISA快速检测方法 |
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| 引用本文： | 祝璟琳,李大宇,肖炜,邹芝英,杨弘. 罗非鱼源无乳链球菌的间接ELISA快速检测方法[J]. 水产学报, 2016, 40(12): 1906-1914. DOI: 10.11964/jfc.20160110254 |
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| 作者姓名： | 祝璟琳 李大宇 肖炜 邹芝英 杨弘 |
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| 作者单位： | 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心,农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室,江苏无锡214081 |
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| 基金项目： | 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（2015JBFM27）；现代农业产业技术体系建设专项（CARS-49）；罗非鱼原良种保种选育 |
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| 摘 要： | 以罗非鱼源无乳链球菌为抗原,免疫新西兰兔获得高效价的多克隆抗体;以此多克隆抗体作为一抗,羊抗兔Ig G-HRP作为酶标二抗,建立无乳链球菌的间接ELISA快速检测法。采用棋盘滴定法确定抗原与一抗的最佳工作浓度分别为106 CFU/m L和1∶10 000;酶标二抗的最适工作浓度为1∶1000。病原菌检测灵敏度为每孔103 CFU。该方法标准化后具有快速、灵敏等特性,与海豚链球菌等其他常见水产病原菌无交叉反应;阻断实验中的阻断率达72.02%;交叉反应和阻断实验的结果显示该方法具有较高的特异性。将该方法标准化后检测了44株2007—2013年分离的罗非鱼无乳链球菌,阳性检测率为100%;对人工感染后死亡的30尾罗非鱼的脑组织进行检测,阳性检测率为100%;对人工感染后未死亡的20尾罗非鱼的脑,肝和脾组织进行检测,脑的阳性检测率为0%,肝的阳性检测率为25%,脾的阳性检测率为50%;表明该技术不仅能够检测已发病的罗非鱼,而且能够检测无症状的带菌罗非鱼,该方法的建立有助于快速准确地诊断由无乳链球菌引起的罗非鱼链球菌病。
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| 关 键 词： | 罗非鱼 无乳链球菌 酶联免疫反应 早期检测 |
| 收稿时间： | 2016-01-21 |
| 修稿时间： | 2016-06-14 |
Indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for rapid detection of Streptococcus agalactiae isolated from tilapia |
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| ZHU Jinglin,LI Dayu,XIAO Wei,ZOU Zhiying and YANG Hong. Indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for rapid detection of Streptococcus agalactiae isolated from tilapia[J]. Journal of Fisheries of China, 2016, 40(12): 1906-1914. DOI: 10.11964/jfc.20160110254 |
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| Authors: | ZHU Jinglin LI Dayu XIAO Wei ZOU Zhiying YANG Hong |
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| Affiliation: | Key Laboratory of Freshwater Fisheries and Germplasm Resources Utilization,Ministry of Agriculture Freshwater Fisheries Research Center,Chinese Academy of Fishery Sciences,Key Laboratory of Freshwater Fisheries and Germplasm Resources Utilization,Ministry of Agriculture Freshwater Fisheries Research Center,Chinese Academy of Fishery Sciences,Key Laboratory of Freshwater Fisheries and Germplasm Resources Utilization,Ministry of Agriculture Freshwater Fisheries Research Center,Chinese Academy of Fishery Sciences,Key Laboratory of Freshwater Fisheries and Germplasm Resources Utilization,Ministry of Agriculture Freshwater Fisheries Research Center,Chinese Academy of Fishery Sciences,Key Laboratory of Freshwater Fisheries and Germplasm Resources Utilization,Ministry of Agriculture Freshwater Fisheries Research Center,Chinese Academy of Fishery Sciences |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Oreochromis niloticus Streptococcus agalactiae enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) detection in the early stage |
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