橡胶树MAPK同源蛋白HbNTF4的克隆、原核表达及纯化

植物有丝分裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)参与调控植物低温胁迫应答,但橡胶树中MAPK同源蛋白NTF4至今未被克隆与鉴定,克隆和研究HbNTF4的功能对橡胶耐寒品种的选育具有重要意义。本研究成功从橡胶树c DNA中克隆出HbNTF4基因,氨基酸序列分析表明HbNTF4与其他物种序列同源性很高。通过qRT-PCR发现橡胶树4℃处理后HbNTF4基因表达量上升。将HbNTF4构建至原核表达载体p ET-28a上,在Escherichia coli BL21 (DE3)中诱导并成功纯化出HbNTF4重组蛋白。SDS-PAGE电泳检测表明HbNTF4在37℃诱导8 h,IPTG浓度为0.2 mmol/L的条件下最优,最后成功纯化出符合预期大小的可溶性蛋白,为深入研究HbNTF4的生物学功能提供了理论依据。