| 基于Kingfisher Flex系统树木叶片RNA的提取方法比较及优化 |
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| 引用本文： | 何佳悦,王莉,贾翠蓉,朱显亮,王亚琴,翁启杰,周长品,甘四明,李发根.基于Kingfisher Flex系统树木叶片RNA的提取方法比较及优化[J].分子植物育种,2020(9):3009-3017. |
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| 作者姓名： | 何佳悦 王莉 贾翠蓉 朱显亮 王亚琴 翁启杰 周长品 甘四明 李发根 |
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| 作者单位： | 中国林业科学研究院;中国林业科学研究院热带林业研究所 |
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| 基金项目： | 中国林科院基本科研业务费专项(CAFYBB2017MA006);广东省林业科技创新项目(2016KJCX014)共同资助。 |
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| 摘 要： | 随着林木功能基因组学的发展,如何快速高效地提取高质量的核酸变得越来越重要。本研究基于Kingfisher Flex全自动磁珠提取纯化系统,以细叶桉叶片为材料,利用5种磁珠法RNA提取试剂盒(A/B/C/D/E)比较提取RNA的质量和纯度,筛选出试剂盒C为最佳试剂盒。在试剂盒C默认提取程序基础上,利用正交设计L9(34),研究Kingfisher Flex全自动磁珠提取纯化系统上不同洗涤速度、洗脱速度及时间等机器参数对提取RNA的浓度和纯度的影响。正交试验结果表明,对提取RNA的浓度和纯度影响最大的机器参数是洗涤速度,正交试验最优程序组合下提取RNA的纯度稍优于试剂盒C,但是得率仅为试剂盒C的1/3,综合比较后确认试剂盒C默认程序为提取细叶桉叶片RNA的最优提取程序。另外利用试剂盒C也分别对降香黄檀、大果紫檀、油楠、檀香、黑木相思和柚木这六个树种的叶片RNA进行提取,结果表明提取出的RNA均满足cDNA建库以及转录组测序实验的要求。本研究建立了Kingfisher Flex全自动磁珠提取纯化系统上树木叶片RNA的高效提取方法,对树木叶片高通量RNA提取有重要的应用价值,并为其他树种在提取RNA程序上对相关参数进行优化和设置提供了参考。
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| 关 键 词： | Kingfisher Flex系统 树木叶片 RNA提取 磁珠法RNA提取试剂盒 |
Comparison and Optimization of RNA Extraction Methods from Tree Leaves Based on Kingfisher Flex System |
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| He Jiayue,Wang Li,Jia Cuirong,Zhu Xianliang,Wang Yaqin,Weng Qijie,Zhou Changpin,Gan Siming,Li Fagen.Comparison and Optimization of RNA Extraction Methods from Tree Leaves Based on Kingfisher Flex System[J].Molecular Plant Breeding,2020(9):3009-3017. |
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| Authors: | He Jiayue Wang Li Jia Cuirong Zhu Xianliang Wang Yaqin Weng Qijie Zhou Changpin Gan Siming Li Fagen |
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| Institution: | (State Key Laboratory of Tree Genetics and Breeding,Chinese Academy of Forestry,Beijing,100093;Key Laboratory of State Forestry Administration on Tropical Forestry Research,Research Institute of Tropical Forestry,Chinese Academy of Forestry,Guangzhou,510520) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Kingfisher Flex system Tree leaves RNA extraction Magnetic RNA isolation kit |
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