禽源大肠杆菌荧光定量PCR方法的构建及应用 |
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引用本文: | 高艺玮,田堯,孙少迪,牛灵玥,文立华,杨俊,王红兵,王慧,杜丽飞,刘俊琦,周望平.禽源大肠杆菌荧光定量PCR方法的构建及应用[J].湖南畜牧兽医,2024(1):31-35. |
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作者姓名: | 高艺玮 田堯 孙少迪 牛灵玥 文立华 杨俊 王红兵 王慧 杜丽飞 刘俊琦 周望平 |
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作者单位: | 1. 湖南省畜牧兽医研究所;2. 湖南农业大学动物医学院 |
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基金项目: | 湖南现代农业产业技术体系项目(湘[2022]222号); |
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摘 要: | 为建立一种灵敏、准确且快速检测禽源大肠杆菌的方法,根据禽源大肠杆菌uidA基因的一节特异性保守序列设计引物,建立用于禽源大肠杆菌的荧光定量PCR(qPCR)检验方法,并对其各方面进行评价。试验数据表明所建立的qPCR方法的Ct值与标准品在4.69×102~4.69×109copies/μL范围内存在优良的线性关系,线性相关系数为R2=0.993;该方法标准曲线方程为y=-3.2786x+39.032,熔解曲线表现为单峰,不存在非特异性扩增。对重组质粒标准品的最低检测浓度为4.69×102copies/μL,是普通PCR方法的1000倍。该方法检测临床样本阳性率为68.3%(41/60),普通PCR阳性检出率为23.3%(14/60),阳性检出率高出45%。此次研究建立的检测禽源大肠杆菌的荧光定量PCR检测方法可用于禽源大肠杆菌的快速诊断,对于禽大肠杆菌病的监测具有重要意义。
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关 键 词: | 禽源大肠杆菌 uidA基因 实时荧光定量PCR |
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