| 鸭源新城疫病毒NP蛋白的原核表达与间接ELISA方法的建立 |
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| 引用本文： | 程彦丽,刁有祥,张坤,杨建朋,国纪垒,肖坡.鸭源新城疫病毒NP蛋白的原核表达与间接ELISA方法的建立[J].中国兽医学报,2013,33(1):24-28,79. |
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| 作者姓名： | 程彦丽 刁有祥 张坤 杨建朋 国纪垒 肖坡 |
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| 作者单位： | 山东农业大学动物科技学院,山东泰安,271018 |
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| 基金项目： | 现代农业产业技术体系专项资金资助项目(CARS-43-34);国家公益性行业(农业)科研专项基金资助项目(201003012);山东省科技攻关资助项目(2007GG30009001);山东省科技发展项目(鸭源副黏病毒致病性研究) |
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| 摘 要： | 根据GenBank发表的鸭源新城疫病毒SDWF02株NP基因序列,设计并合成1对特异性引物,扩增出鸭源新城疫病毒的NP基因,与原核表达载体pET-28a构建重组质粒pET28a-NP,经鉴定后转化Rosetta感受态细胞,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western-blot分析表明,54 000的融合蛋白得以表达,该蛋白能与鸭源新城疫的阳性血清发生特异性的反应.以纯化的重组蛋白为包被抗原,建立检测鸭源新城疫抗体的间接ELISA方法,经方阵滴定确定最佳包被质量液为pH9.6的碳酸盐缓冲液,最佳包被质量浓度为10 ng/孔,血清最佳稀释度为1∶1 000.经应用试验表明该方法具有良好的特异性、可重复性和敏感性,为临床检测鸭源新城疫抗体水平提供了一种简单、准确、快速的诊断方法.
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| 关 键 词： | 鸭源NDV NP蛋白 原核表达 ELISA |
Prokaryotic expression of duck Newcastle disease virus NP protein and establishment of an indirect ELISA based on the recombinant fusion protein |
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| Institution: | CHENG Yan-li,DIAO You-xiang*,ZHANG Kun,YANG Jian-peng,GUO Ji-lei,XIAO Puo(College of Animal Science and Technology,Shandong Agricultural University,Tai’an,Shandong 271018,China) |
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