| 大豆翻译延伸因子GmEF1A干扰载体的构建及大豆遗传转化 |
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| 引用本文： | 廖文林,栾鹤翔,高乐,丁雪妮,宋英培,殷金龙,牛浩鹏,智海剑.大豆翻译延伸因子GmEF1A干扰载体的构建及大豆遗传转化[J].大豆科学,2016(6):902-910. |
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| 作者姓名： | 廖文林 栾鹤翔 高乐 丁雪妮 宋英培 殷金龙 牛浩鹏 智海剑 |
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| 作者单位： | 南京农业大学国家大豆改良中心/作物遗传与种质创新国家重点实验室,江苏南京,210095 |
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| 基金项目： | 转基因生物新品种培育重大专项(2008ZX08004-004)，国家自然科学基金(31371646;31571690)，国家现代农业产业技术体系(CARS-004)，江苏省现代作物生产协同创新中心(JCIC-MCP). |
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| 摘 要： | 研究发现GmeEF1A与大豆花叶病毒的P3蛋白存在互作关系,并且参与SMV在大豆体内的繁殖。通过大豆GmeEF1A基因5个拷贝的核苷酸和氨基酸序列比对,确定其保守区间,克隆得到180 bp的干扰片段GmeEF1Ai。利用GATEWAY技术构建RNA干扰(RNA interference,RNAi)表达载体pB7GWIWG2(II)-e EF1Ai,并通过农杆菌介导的子叶节转化法导入到受体大豆品种天隆1号中。测序结果显示重组质粒中插入的干扰片段GmeEF1Ai与目标序列完全符合,通过PCR和酶切验证表明GmeEF1Ai是以反向重复形式插入到表达载体中。经转化获得组培苗8株,PCR、除草剂涂抹和PAT/bar试纸条多重检测确认7株为阳性。绝对荧光定量结果显示,阳性苗中4株为单拷贝。GmeEF1A基因表达量分析结果显示GmeEF1Ai载体对GmeEF1A的5个拷贝基因有不同程度的阻抑。这不仅为验证GmeEF1A基因在大豆受SMV侵染时的功能提供试验材料,也为大豆抗病育种提供新的种质。
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| 关 键 词： | 大豆花叶病毒 GmeEF1A基因 RNAi GATEWAY技术 农杆菌介导大豆遗传转化 |
Interference Vector Construction of Soybean Translation Elongation Factor GmeEF1A and Soybean Transformation |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Soybean mosaic virus GmeEF1A gene RNAi GATEWAY technology Agrobacterium-mediated soybean transformation |
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