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| 棉花纤维RNA提取方法的比较及酵母双杂交文库的构建 | |
| 引用本文： | 徐雯,邓宗汉,陈婷婷,彭良才,夏涛.棉花纤维RNA提取方法的比较及酵母双杂交文库的构建[J].中国农学通报,2012,28(30):177-183. |
| 作者姓名： | 徐雯 邓宗汉 陈婷婷 彭良才 夏涛 |
| 作者单位： | 1. 华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室,武汉430070;华中农业大学生物质与生物能源研究中心,武汉430070;华中农业大学生命科学技术学院,武汉430070 2. 华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室,武汉430070;华中农业大学生物质与生物能源研究中心,武汉430070;华中农业大学植物科学技术学院,武汉430070 3. 华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室,武汉430070;华中农业大学生物质与生物能源研究中心,武汉430070;华中农业大学生命科学技术学院,武汉430070;华中农业大学植物科学技术学院,武汉430070 4. 华中农业大学生物质与生物能源研究中心,武汉430070;华中农业大学生命科学技术学院,武汉430070 |
| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划“新型能源作物细胞壁生物合成分子机理研究”(2010CB134401) |
| 摘 要： | 为了从棉花纤维中提取高质量的RNA用于构建酵母双杂交文库，采用4种不同的方法提取9天和19天棉花纤维的RNA。琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法检测结果表明：热硼酸法适用于初生幼嫩纤维和次生加厚纤维的RNA提取，CTAB-PVP法仅适用于初生幼嫩纤维的RNA提取，异硫氰酸胍法和高盐高pH值法提取的RNA由于杂质含量较多而影响反转录效果。采用热硼酸法大量提取总RNA，纯化后的mRNA反转录为cDNA，通过重组将扩增的cDNA片段定向插入到pGADT7-Rec AD克隆载体中，得到棉纤维9天和19天的酵母双杂交cDNA文库。2个文库的滴度分别是1.01×107 cfu /mL和8×106 cfu /mL，cDNA插入片段长度集中分布在250~2500 bp之间。由此可以看出，构建的2个棉纤维文库质量较高，可用于棉花纤维素合成和调控途径的研究。 |
| 关 键 词： | 效益分析 效益分析 |
| 收稿时间： | 3/6/2012 12:00:00 AM |
| 修稿时间： | 2012/4/17 0:00:00 |
RNA Isolation and Yeast Two Hybrid Library Construction of Cotton Fibers |
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| Xu Wen , Deng Zonghan , Chen Tingting , Peng Liangcai , Xia Tao.RNA Isolation and Yeast Two Hybrid Library Construction of Cotton Fibers[J].Chinese Agricultural Science Bulletin,2012,28(30):177-183. | |
| Authors: | Xu Wen Deng Zonghan Chen Tingting Peng Liangcai Xia Tao |
| Institution: | 2,3(1 National Key Laboratory of Crop Genetic Improvement,Huazhong Agricultural University,Wuhan 430070;2 Biomass and Bioenergy Research Centre,Huazhong Agricultural University,Wuhan 430070;3 College of Life Science and Technology,Huazhong Agricultural University,Wuhan 430070;4 College of Plant Science and Technology,Huazhong Agricultural University,Wuhan 430070) |
| Abstract: | |
| Keywords: | cotton fibers hot borate method CTAB-PVP method yeast two hybrid library |
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